目的探討通過尾靜脈移植方式研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對擴(kuò)張型心肌病模型大鼠心肌微血管再生及心功能恢復(fù)的影響。方法1.構(gòu)建擴(kuò)張型心肌病(DCM)大鼠模型并鑒定采用六周齡左右的雄性SD大鼠140只,隨機(jī)分為正常組對照組(n=20)和擴(kuò)張型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)模型組(n=120)。DCM模型組大鼠采用每周腹腔注射阿霉素1.0mg/kg,每周2次,連續(xù)8周的方法構(gòu)建DCM模型。注射藥物1周后,行超聲心動圖來檢測評價(jià)大鼠心功能,免疫組化標(biāo)記心肌組織CD34,計(jì)算微血管密度,同時(shí)行心肌組織HE及Masson染色。2.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical mesenchymal stem cells,hUCMSCs)外泌體(exosome)的提取及鑒定運(yùn)用組織塊法原代培養(yǎng)hUCMSCs,采用傳代培養(yǎng)的第3代hUCMSCs行流式細(xì)胞儀鑒定干細(xì)胞表面標(biāo)志物;收集3-5代的hUCMSCs無血清培養(yǎng)基,,試劑盒法提取外泌體;應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察獲取的外泌體(exosomes)形態(tài);蛋白免疫印跡法(western blot)檢測人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(h...

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
實(shí)驗(yàn)材料及方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        1.2 臍帶標(biāo)本
        1.3 主要試劑
        1.4 主要設(shè)備
    2.實(shí)驗(yàn)步驟
        2.1 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)鑒定
            2.1.1 原代hUCMSCs的分離、培養(yǎng)及傳代
            2.1.2 hUCMSCs 的鑒定
        2.2 hUCMSCs-exo的提取及鑒定
            2.2.1 hUCMSCs-exo的提取
            2.2.2 hUCMSCs-exo的鑒定
                2.2.2.1 透射電鏡觀察外泌體
                2.2.2.2 Western blot檢測hUCMSCs-exo表面特異性標(biāo)志蛋白CD81、CD9 的表達(dá)
                2.2.2.3 納米顆粒跟蹤分析技術(shù)鑒定外泌體
        2.3 DCM動物模型的建立及鑒定
        2.4 hUCMSCs-exo實(shí)驗(yàn)分組及各實(shí)驗(yàn)步驟
            2.4.1 DCM實(shí)驗(yàn)分組及hUCMSCs-exo干預(yù)處理
            2.4.2 檢測干預(yù)后大鼠心肌微血管數(shù)量變化
            2.4.3 Western blot檢測各組大鼠心肌組織VEGF-2 的表達(dá)
        2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定
        1.1 hUCMSCs培養(yǎng)結(jié)果
        1.2 hUCMSCs 的鑒定
    2 hUCMSCs-exo 的鑒定結(jié)果
    3 SD大鼠 DCM 建模后的情況
        3.1 建模過程中正常組大鼠與DCM組大鼠生存率變化
        3.2 體質(zhì)量變化
        3.3 DCM大鼠與正常組大鼠超聲心動圖結(jié)果比較
        3.4 HE及 Masson染色結(jié)果
    4 尾靜脈注射hUCMSCs-exo對 DCM大鼠心肌微血管及心功能的影響
        4.1 尾靜脈注射hUMSCs-exo后大鼠的一般情況
        4.2 hUCMSCs-exo移植后四組大鼠超聲心動圖的結(jié)果比較
        4.3 尾靜脈注射外泌體后大鼠心肌組織微血管的表達(dá)
        4.4 蛋白水平VEGF-2在hUCMSCs-exo移植后各組大鼠心肌的表達(dá)狀況
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文
英文縮略詞
致謝



本文編號：3980334