本文關(guān)鍵詞：氧化應(yīng)激損傷中NFKB1多態(tài)性對(duì)NF-κB信號(hào)通路及細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以H2O2誘導(dǎo)人原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)建立體外氧化應(yīng)激損傷模型,觀測(cè)核因子κB 1基因-94號(hào)位點(diǎn)ATTG插入/缺失(-94ins/del ATTG,rs28362491)對(duì)NF-κB信號(hào)通路及細(xì)胞凋亡的影響。方法:1)分離并培養(yǎng)原代HUVECs,細(xì)胞純度鑒定采用免疫熒光法檢測(cè)vWF抗體表達(dá)及流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD31抗體表達(dá);2)采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)法將HUVEC分為插入型(II型)、缺失型(DD型)以及雜合子型(ID型);3)Western blot法及免疫熒光標(biāo)記法檢測(cè)NFKB1不同基因型HUVECs中P50蛋白的表達(dá)水平;4)CCK-8法檢測(cè)不同濃度及不同誘導(dǎo)時(shí)間H2O2對(duì)HUVECs活力的影響,選取最適宜的H2O2誘導(dǎo)濃度及時(shí)間,建立體外氧化應(yīng)激損傷模型;5)以H2O2誘導(dǎo)HUVECs激活NF-κB信號(hào)通路,Western blot法及免疫熒光標(biāo)記法檢測(cè)NFKB1不同基因型HUVECs細(xì)胞核內(nèi)P50、P65蛋白表達(dá)水平;6)以H2O2誘導(dǎo)HUVECs細(xì)胞凋亡,Western blot法及流式細(xì)胞儀檢測(cè)NFKB1不同基因型細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:1)實(shí)驗(yàn)共收集細(xì)胞63株,免疫熒光法檢測(cè)vWF抗體表達(dá)量為98±0.12%,流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD31抗體表達(dá)量為93.3%;2)PCR-RFLP分型結(jié)果顯示:所收集的63株HUVECs中,NFKB1插入型(II型)13株,缺失性(DD型)13株,雜合子型(ID型)37株;3)Western blot及免疫熒光結(jié)果顯示:DD型P50蛋白表達(dá)水平較II型顯著降低;4)CCK-8結(jié)果顯示:200 umol/L H2O2誘導(dǎo)HUVECs 12 h即可明顯降低細(xì)胞活力;5)Western blot及免疫熒光結(jié)果顯示:200 umol/L H2O2誘導(dǎo)HUVECs 12 h可激活NF-κB信號(hào)通路,且DD型HUVECs細(xì)胞核中P50、P65蛋白表達(dá)水平顯著低于II型;6)Western blot及流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示:200 umol/L H2O2誘導(dǎo)HUVECs12 h可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡,且DD型凋亡水平較II型顯著增高。結(jié)論:1)原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)可以獲得高純度的HUVECs,且具有簡(jiǎn)單、實(shí)用、有效、易操作等特點(diǎn);2)NFKB1基因多態(tài)性可影響NF-κB信號(hào)通路中P50蛋白的表達(dá)水平;3)H2O2可抑制HUVECs活力,建立體外氧化應(yīng)激損傷模型;4)H2O2誘導(dǎo)HUVECs可激活細(xì)胞內(nèi)NF-κB信號(hào)通路,NFKB1基因多態(tài)性可影響NF-κB信號(hào)通路的活化水平;5)H2O2誘導(dǎo)HUVECs激活NF-κB信號(hào)通路可促使細(xì)胞發(fā)生凋亡,NFKB1不同基因型中細(xì)胞凋亡水平具有顯著差異。
【關(guān)鍵詞】：NFKB1 NF-κB信號(hào)通路 H2O2 人原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 動(dòng)脈粥樣硬化
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-31
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料16-20
• 1.1 主要儀器設(shè)備16-17
• 1.2 主要試劑及材料17-19
• 1.3 標(biāo)本制備及主要試劑配制19-20
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法20-30
• 2.1 原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)20-22
• 2.2 組織DNA提取及基因分型22-24
• 2.3 NFKB1基因多態(tài)性對(duì)HUVECs內(nèi)P50蛋白表達(dá)的影響24-27
• 2.4 氧化應(yīng)激對(duì)HUVECs毒性活力的影響27-28
• 2.5 NFKB1基因多態(tài)性及氧化應(yīng)激對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響28-29
• 2.6 NFKB1基因多態(tài)性及氧化應(yīng)激對(duì)HUVECs凋亡的影響29
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法29-30
• 3. 技術(shù)路線圖30-31
• 結(jié)果31-41
• 討論41-49
• 小結(jié)49-50
• 致謝50-51
• 參考文獻(xiàn)51-59
• 綜述59-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文65

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1 樸春麗;于淼;姜U

本文編號(hào)：390488