目的:明確香煙煙霧提取物是否經(jīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激CHOP信號通路促進人肺動脈內(nèi)皮細胞凋亡,以及苯基丁酸(PBA)是否具有凋亡抑制作用。方法:通過慢病毒轉(zhuǎn)染重組RNA沉默HPAEC人肺動脈內(nèi)皮細胞CHOP基因表達,將未進行CHOP基因干預(yù)的HPAEC人肺動脈內(nèi)皮細胞及CHOP基因沉默的HPAEC^-CHOP人肺動脈內(nèi)皮細胞各自分為對照組(Ctrl組,常規(guī)培養(yǎng)不作特殊處理)、香煙煙霧提取物組(CSE組,培養(yǎng)基中加入10%香煙煙霧提取物)、苯基丁酸組(PBA組,培養(yǎng)基中加入5mmol/L的PBA)和香煙煙霧提取物聯(lián)合苯基丁酸組(CSE+PBA組,培養(yǎng)基中加入10%香煙煙霧提取物以及5mmol/L的PBA),各組細胞分別處理6h、12h、24h,收集后用于后續(xù)實驗。通過透射電鏡觀察細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)變化,利用流式細胞儀檢測細胞凋亡比例,Western-blot檢測CHOP蛋白表達水平,Realtime-PCR檢測CHOP mRNA表達水平。P<0.05認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.HPAEC^-CHOP細胞CHOP蛋白表達水平較HPAEC細胞降低大于80%...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖3.1倒置顯微鏡下細胞形態(tài)觀察及免疫組化染色鑒定注：A1、A2：倒置相差顯微鏡下細胞形態(tài)觀察（100×）、（200×）；B1、B2：CD31抗體HPAECs免疫組化染色（100×）、（400×）；C1、C2：vWF抗體HPAECs免疫組化染色（100×）、（400×）

33圖3.1倒置顯微鏡下細胞形態(tài)觀察及免疫組化染色鑒定：A1、A2：倒置相差顯微鏡下細胞形態(tài)觀察（100×）、（200×）；B1、B2：CD31抗體PAECs免疫組化染色（100×）、（400×）；C1、C2：vWF抗體HPAECs免疫組化染色（100×）、（400....

圖3.2熒光顯微鏡觀察細胞慢病毒感染情況（100×）

圖3.2熒光顯微鏡觀察細胞慢病毒感染情況（100×）2：對照組白光圖、熒光圖；B1、B2：空載組白光圖、熒光圖；C1、C2：cho、熒光圖；D1、D2：chop-shRNA#2組白光圖、熒光圖；E1、E2：chop-熒光圖

圖3.3慢病毒干擾細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激后CHOP蛋白表達水平注：△P＜0.05VS對照組；▲P＜0.05VSChop-shRNA#3

附圖CHOP（29KD）β-actin（42KChop-shRNA#3Chop-shRNA#2Chop-shRNA#1照對組組載空

圖3.4各組細胞不同干預(yù)條件處理24h后透射電鏡下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)(5K倍)

HPAEC細胞:PBA組HPAEC-CHOP細胞:PBA組HPAEC細胞:CSE組HPAEC-CHOP細胞:CSE組

本文編號：3901731