發(fā)布時間：2024-02-01 10:34

　　第一章白細(xì)胞介素-8(IL-8)基因過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建 摘要：目的：冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(簡稱冠心病)是威脅中國公眾健康的重要疾病。研究發(fā)現(xiàn),冠心病患者產(chǎn)生的冠狀動脈側(cè)支循環(huán)(CCC),有利于維持心肌活力,保護(hù)心功能。大量的動物實驗證實了VEGF、bFGF等促血管生長因子蛋白和基因(質(zhì)粒、腺病毒)應(yīng)用于缺血心肌可促進(jìn)缺血區(qū)側(cè)支血管生長,代償性替補(bǔ)供血血管,增加缺血心肌灌注,減小梗死面積,改善心功能。早期研究發(fā)現(xiàn)IL-8在炎癥中起重要作用,隨著對IL-8及其受體生物學(xué)活性和作用機(jī)制研究的深入,發(fā)現(xiàn)它還具有促有絲分裂與血管生成的作用,但I(xiàn)L-8是否具有促進(jìn)心肌缺血區(qū)側(cè)支血管生長,增加缺血心肌灌注未見有文獻(xiàn)報道。本實驗擬構(gòu)建IL-8基因過表達(dá)慢病毒載體,為研究IL-8在缺血心肌血管新生中的作用奠定基礎(chǔ)。 方法：從購買的cDNA文庫中,利用PCR方法釣取IL-8目的基因。將IL-8目的基因與酶切線性化的慢病毒載體進(jìn)行定向交換,其產(chǎn)物轉(zhuǎn)化細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞。對長出的克隆先進(jìn)行菌落PCR鑒定,再對PCR鑒定陽性的克隆進(jìn)行測序和比對分析,比對正確的克隆即為構(gòu)建成功的目的質(zhì)粒。然后將構(gòu)建好的融合蛋白...

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【部分圖文】：

圖1-1pGC-FU基礎(chǔ)栽體

每次在延伸階段讀取吸光值；溶解曲線制作：PCR結(jié)束后，95°C變性1分鐘。然后冷卻至55°C，5°C，每一步增加0.5°C，保持30秒，同時讀取吸光值。果與附圖

圖1-5載體酵切圖譜

糖凝膠電泳圖譜：

圖1-6陽性克隆的PCR鑒定圖譜

圖1-6陽性克隆的PCR鑒定圖譜1#陰性對照（ddHzO)2#陰性對照（空載自連對照組）3#陽性對照（GAPDH)4#Marker5kb,3kb,2kb,1.5kb,1Kb,750bp,500bp,250bp,100bp5#~12#IL....

圖1PI3K-Akt信號通路.

圖1PI3K-Akt信號通路.PDK-Akt的負(fù)調(diào)控磷脂酰肌醇PI的肌醇環(huán)上有5個位點(diǎn)可被磷酸化，不同位點(diǎn)的磷酸化胞的功能具有不同的重要影響。反之，磷酸化肌醇產(chǎn)物脫磷酸后部分功或消失。研究表明PI3K-Akt信號通路的活性被類脂磷酸酶PTEN(phosphatensinho....

本文編號：3891973