發(fā)布時(shí)間：2024-01-27 12:25

　　第一章成年SD大鼠原代心肌細(xì)胞分離培養(yǎng),PLB及SERCA2a重組腺病毒載體的純化及轉(zhuǎn)染研究目的分離得到成年大鼠原代心肌細(xì)胞并成功培養(yǎng),分離、純化包含犬PLB和SERCA的腺病毒載體,并轉(zhuǎn)染至分離成功的大鼠原代心肌細(xì)胞中;研究方法采用Lan’gendorff灌流法及Liberase酶解法分離得到成年SD大鼠原代心肌細(xì)胞,進(jìn)一步分離純化包含犬PLB和SERCA的腺病毒載體,并轉(zhuǎn)染至培養(yǎng)的原代心肌細(xì)胞中,觀察細(xì)胞存活時(shí)間及細(xì)胞狀態(tài),通過(guò)免疫組化法、western blot、calcium-imaging觀察未轉(zhuǎn)染細(xì)胞及轉(zhuǎn)染成功后,心肌細(xì)胞PLB及SERCA分布、單個(gè)細(xì)胞功能等。研究結(jié)果1.成功分離出大鼠原代心肌細(xì)胞,分離存活率穩(wěn)定在70-80%,并可穩(wěn)定培養(yǎng)3-5天;2.包含犬PLB和SERCA2a的腺病毒載體經(jīng)分離純化,效價(jià)比較高,并可成功轉(zhuǎn)染cos-1細(xì)胞,肉眼觀測(cè)轉(zhuǎn)染成功率達(dá)80%以上,western blot檢測(cè)到新生蛋白成功表達(dá),且含量隨病毒濃度增加呈遞增趨勢(shì);結(jié)論Lan’gendorff灌流法分離大鼠原代心肌細(xì)胞方法有效可行,成功率高,分離純化重組腺病毒載體方法成熟且轉(zhuǎn)染率高,...

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 成年SD大鼠原代心肌細(xì)胞分離及培養(yǎng),PLB及SERCA2a重組腺病毒載體的擴(kuò)增、純化及轉(zhuǎn)染
    一、材料和方法
    二、結(jié)果
    三、討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 正常SD大鼠原代心肌細(xì)胞新生PLB及SERCA2a運(yùn)輸途徑及其對(duì)心肌細(xì)胞自發(fā)鈣活動(dòng)、鈣離子通道電流的影響
    一、材料和方法
    二、結(jié)果
    三、討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 心肌梗死SD大鼠原代心肌細(xì)胞PLB及SERCA2a的運(yùn)輸途徑,及其對(duì)心肌細(xì)胞自發(fā)鈣活動(dòng)、鈣離子通道電流的影響
    一、材料和方法
    二、結(jié)果
    三、討論
    全文總結(jié)及局限性
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3886963