研究背景:含黃素單氧化酶2(FMO2)是通過以NADP+和FAD為輔酶和輔基實(shí)現(xiàn)異種物質(zhì)代謝的含黃素單氧化酶(FMO)家族中的一員,且具有不同于家族其他成員的特點(diǎn),即高表達(dá)在與纖維化密切相關(guān)的肺,而非在與藥物代謝密切相關(guān)的肝臟。然FMO2在非代謝領(lǐng)域相關(guān)的作用、功能和具體機(jī)制e仍有待進(jìn)一步闡釋。在前期實(shí)驗(yàn)中,通過對(duì)三組SD大鼠(sham組,心梗組,心梗+人經(jīng)血干細(xì)胞移植組)的基因芯片分析及驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)FMO2表達(dá)在心梗后顯著下調(diào),而在經(jīng)血干細(xì)胞移植后心功能改善的同時(shí)FMO2表達(dá)也明顯提高。而在大鼠的心臟組織中,我們發(fā)現(xiàn)FMO2于心臟成纖維細(xì)胞中的表達(dá)遠(yuǎn)超過其在心肌細(xì)胞中的表達(dá)。因此,我們推測(cè)FMO2可能在心梗后的纖維化過程起重要作用,但具體的作用及機(jī)制尚不明確,有待進(jìn)一步深入研究。研究方法及結(jié)果:我們?cè)谛墓：蟮腟D大鼠中通過注射過表達(dá)FMO2的慢病毒上調(diào)FMO2,發(fā)現(xiàn)心梗后14和28天的心功能相較于對(duì)照組有顯著的改善。同時(shí),將病理切片經(jīng)天狼星紅和MASSON染色后結(jié)果顯示,在FMO2過表達(dá)后,大鼠心臟的梗死區(qū)域纖維環(huán)周長(zhǎng)、非梗死區(qū)纖維化面積均顯著小于對(duì)照組,而心梗區(qū)段的心肌細(xì)胞存活數(shù)顯著...

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致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
1 引言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 細(xì)胞及心臟樣本的收集
    3.2 Western Blot
    3.3 細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)條件
    3.4 病毒的構(gòu)建
    3.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.6 組織學(xué)分析
    3.7 細(xì)胞免疫熒光染色
    3.8 大鼠心臟超聲
    3.9 熒光定量PCR
    3.10 蛋白質(zhì)免疫共沉淀(Co-IP)
    3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
4 結(jié)果
    4.1 FMO2在人,大鼠和小鼠以及食蟹猴心梗后被顯著下調(diào)
    4.2 FMO2在組織和細(xì)胞中的表達(dá)差異
    4.3 大鼠心梗后過表達(dá)FMO2能顯著改善心臟功能
    4.4 大鼠心梗后過表達(dá)FMO2能顯著減少心梗后的纖維化
    4.5 大鼠心梗后在非心肌細(xì)胞中靶向過表達(dá)FMO2亦能減輕心梗后的纖維化以及改善心功能
    4.6 大鼠成體干擾FMO2表達(dá)能一定程度降低心功能以及增加纖維化
    4.7 FMO2-/-大鼠心功能顯著下降,并伴有纖維化增多
    4.8 在FMO2-/-的大鼠中補(bǔ)償非心肌細(xì)胞特異性的FMO2過表達(dá)病毒能顯著改善FMO2-/-大鼠的心功能
    4.9 體外模型的選擇和建立以及依據(jù)
    4.10 FMO2過表達(dá)能在被TGF-β刺激以后減少NRCF的纖維化基因表達(dá)
    4.11 FMO2-/-大鼠的心臟成纖維細(xì)胞相對(duì)于正常SD大鼠的心臟成纖維細(xì)胞具有顯著升高的纖維化特性
    4.12 FMO2補(bǔ)償能減輕心梗病人成纖維細(xì)胞的纖維化表象
    4.13 FMO2抑制心臟成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化以及膠原沉積的機(jī)制探討
    4.14 FMO2通過與CYP2J3的結(jié)合來抑制SMAD2/3的磷酸化
    4.15 CYP2J3是FMO2介導(dǎo)的抑制纖維化作用的必須因素
5 討論
綜述
    參考文獻(xiàn)
申請(qǐng)者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3861872