發(fā)布時間：2023-09-28 23:14

　　目的:心肌缺血/再灌注(I/R)是一種常見的致命性疾病,威脅著全人類的生命健康。由miR-33和miR-503組成的miR-322/503是一種X染色體miRNA簇,在早期心肌細胞中特異性表達,其功能是促進早期心肌細胞的發(fā)育。Smurf2組成的一種E3泛素連接酶。相關(guān)研究表明smad泛素調(diào)節(jié)因子2(smad ubiquitin regulatory factor 2,Smurf2)是miR-322/503的靶點。本實驗以H9c2細胞作為研究對象,模擬心肌缺血再灌注(I/R)損傷處理作為體外模型,假設(shè)Smurf2是miR-322/503的下游靶點,探究miR-322/503通過調(diào)節(jié)Smurf2表達保護心肌缺血再灌注損傷的作用與機制,以期為miR-322/503在心血管疾病中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:1.以H9c2細胞經(jīng)缺氧和缺葡萄糖處理,再經(jīng)再灌注處理作為體外模型以研究心肌缺血再灌注(I/R)損傷。2.通過qRT-PCR測定經(jīng)受I/R的H9c2細胞中的miR-322/503,Smurf2,EZH2的表達水平。3.在miR-322/503轉(zhuǎn)染后,通過MTT測定I/R損傷后H9c2細胞的細胞...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細胞與培養(yǎng)液配制
        2.1.2 主要試劑及產(chǎn)地
        2.1.3 主要儀器及設(shè)備
        2.1.4 實驗器械的準備及滅菌
        2.1.5 主要實驗試劑的配置
    2.2 方法
        2.2.1 H9C2細胞的體外培養(yǎng)
        2.2.2 RNA提取與q-RTPCR
        2.2.3 Western Blot檢測蛋白表達水平
        2.2.4 免疫共沉淀
    2.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析
第3章 結(jié)果
    3.1 miR-322/503在體外I/R模型中下調(diào)
        3.1.1 經(jīng)受I/R的H9c2細胞中miR-322、miR-503及EZH2 mRNA水平顯著降低
        3.1.2 miR-322和miR-503的過表達顯著增促進細胞增殖，抑制細胞凋亡
    3.2 Smurf2是miR-322/503的下游靶點,miR-322/503直接與Smurf2 mRNA結(jié)合,降低Smurf2表達水平保護H9c2細胞免受I/R損傷
        3.2.1 轉(zhuǎn)染生物素標記的miR-322/503引并測定miR-322和miR-503水平
        3.2.2 雙熒光素酶測定miR-322/503與Smurf2 mRNA的作用
    3.3 miR-322/503負性調(diào)節(jié)Smurf2表達并且敲低Smurf2 保護H9c2 細胞免受I/R損傷
        3.3.1 pre-miR-322/503轉(zhuǎn)染H9c2的細胞后miR-322 和miR503水平顯著提高
        3.3.2 pre-miR-322/503轉(zhuǎn)染H9c2的細胞后Smurf2 蛋白表達顯著降低
        3.3.3 Anti-miR-322/503沉默miR-322/503的表達使miR-322 和miR-503水平顯著降低
        3.3.4 Anti-miR-322/503沉默miR-322/503的表達使Smurf2 蛋白水平顯著升高
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3848807