目的1.觀察再灌注期心肌Zip2的表達(dá)是否增加,并探討再灌注時(shí)Zip2表達(dá)上調(diào)是否因鋅含量減少所引起。2.闡明Zip2在心肌缺血/再灌注損傷中的作用。3.探討再灌注時(shí)鋅離子的丟失是否通過激活STAT3來增加Zip2的表達(dá)。方法建立小鼠在體心臟缺血/再灌注模型和H9c2細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型;用電感耦合離子發(fā)射光譜儀(ICPOES)測量心臟組織的鋅含量;用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(RT-PCR)檢測心肌組織中Zip2 mRNA表達(dá)水平;用Western blotting法檢測心肌組織與H9c2細(xì)胞中Zip2、p-STAT3(Tyr705)、STAT3及Tubulin的蛋白表達(dá);利用CCK-8法檢測H9c2細(xì)胞活性;利用LDH、cTn I、CK-MB ELISA試劑盒檢測小鼠血清中酶的活性;用Evans Blue和TTC雙染色法檢測心肌梗死面積大小。結(jié)果1.ICPOES實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,再灌注時(shí)心肌鋅離子含量減少,說明再灌注引起鋅離子丟失。2.RT-PCR和Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,再灌注時(shí)Zip2的mRNA和蛋白表達(dá)均增加,而再灌注初期給予ZnCl₂能夠抑制Z...

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、探究鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體Zip2在心肌缺血/再灌注損傷中的作用
    1.1 材料和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.1.3 常用試劑及藥品
        1.1.4 試劑盒
        1.1.5 siRNA、質(zhì)粒和腺相關(guān)病毒(AAV)
        1.1.6 抗體(一抗、二抗)
        1.1.7 常用試劑配方
        1.1.8 小鼠在體心臟缺血/再灌注(I/R)模型
        1.1.9 心肌梗死面積測定
        1.1.10 在體轉(zhuǎn)染腺相關(guān)病毒(AAV)
        1.1.11 Zip2-Knockout小鼠的構(gòu)建及鑒定
        1.1.12 小鼠血清cTnI、LDH、CK-MB活性的測定
        1.1.13 H9c2心肌細(xì)胞的復(fù)蘇
        1.1.14 H9c2心肌細(xì)胞的傳代
        1.1.15 H9c2心肌細(xì)胞的凍存
        1.1.16 H9c2心肌細(xì)胞計(jì)數(shù)
        1.1.17 H9c2細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型
        1.1.18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1.1.19 siRNA轉(zhuǎn)染
        1.1.20 CCK-8 法測細(xì)胞活性
        1.1.21 Real Time Q-PCR
        1.1.22 BCA法檢測蛋白濃度
        1.1.23 HE染色觀察小鼠心肌形態(tài)變化
        1.1.24 流式細(xì)胞儀測細(xì)胞Zn²⁺濃度
        1.1.25 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        1.1.26 質(zhì)粒提取
        1.1.27 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)
        1.1.28 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 再灌注期心臟組織Zip2 mRNA和蛋白表達(dá)水平均增加
        1.2.2 ZnCl₂抑制再灌注期Zip2的表達(dá)
        1.2.3 Zip2過表達(dá)增加細(xì)胞內(nèi)Zn²⁺濃度
        1.2.4 外源性Zn²⁺減輕缺血/再灌注損傷
        1.2.5 Zip2基因敲除(Zip2-KO)加重心肌缺血/再灌注損傷
        1.2.6 在體轉(zhuǎn)染Zip2腺相關(guān)病毒能夠減輕心肌缺血/再灌注損傷
        1.2.7 Zip2通過維持細(xì)胞鋅穩(wěn)態(tài)而發(fā)揮其心肌保護(hù)作用
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、揭示心肌缺血/再灌注期Zip2表達(dá)增加的調(diào)控機(jī)制
    研究現(xiàn)狀
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 常用試劑
        2.1.4 試劑盒
        2.1.5 STAT3腺相關(guān)病毒(AAV)
        2.1.6 抗體(一抗、二抗)
        2.1.7 常用試劑配方
        2.1.8 小鼠在體心臟缺血/再灌注(I/R)模型
        2.1.9 心肌梗死面積測定
        2.1.10 心肌組織總鋅含量的測定
        2.1.11 在體轉(zhuǎn)染腺相關(guān)病毒(AAV)
        2.1.12 小鼠血清cTnI.、LDH、CK-MB活性的測定
        2.1.13 BCA蛋白定量法
        2.1.14 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 再灌注引起STAT3磷酸化
        2.2.2 再灌注導(dǎo)致心肌鋅離子的丟失
        2.2.3 ZnCl₂能夠抑制再灌注期STAT3的磷酸化
        2.2.4 再灌注期Zip2的表達(dá)被STAT3抑制劑逆轉(zhuǎn)
        2.2.5 在體STAT3過表達(dá)促進(jìn)Zip2的表達(dá)
        2.2.6 STAT3在體過表達(dá)誘導(dǎo)心肌保護(hù)作用
        2.2.7 Zip2基因敲除(Zip2-KO)阻斷STAT3的心肌保護(hù)作用
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
綜述 信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)在心臟疾病中的作用
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3821992