目的觀察miR-497-5p對核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白1(NLRP1)靶向調(diào)控及其對細(xì)胞膽固醇流出的影響。方法生物信息學(xué)與熒光素酶報告基因驗(yàn)證miR-497-5p與NLRP1靶向結(jié)合。人源THP-1單核細(xì)胞經(jīng)佛波酯及氧化低密度脂蛋白處理后成為泡沫細(xì)胞。使用miR-497-5p mimic和miR-497-5p inhibitor處理細(xì)胞。實(shí)時熒光定量PCR和Western blot檢測NLRP1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(ASC)表達(dá)情況。酶聯(lián)免疫吸附法測定細(xì)胞培養(yǎng)液白細(xì)胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量。液體閃爍計數(shù)儀檢測泡沫細(xì)胞膽固醇流出水平。高效液相色譜法檢測泡沫細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量。結(jié)果 miR-497-5p mimic能夠顯著性降低野生型NLRP1 3′UTR報告基因的熒光素酶活性。與對照組相比,miR-497-5p mimic組NLRP1、ASC、Caspase-1的mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào),IL-1β和IL-18分泌明顯減少。miR-497-5p mimic較對照組顯著促進(jìn)細(xì)胞膽固醇流出,減少細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 試劑和儀器
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 熒光素酶報告基因檢測
    1.4 實(shí)時熒光定量PCR
    1.5 Western blot檢測
    1.6 ELISA測定細(xì)胞培養(yǎng)液IL-1β及IL-18含量
    1.7 液體閃爍計數(shù)法測定細(xì)胞膽固醇流出
    1.8 高效液相色譜分析
    1.9 統(tǒng)計分析
2 結(jié) 果
    2.1 miR-497-5p與NLRP1 3′UTR靶向結(jié)合
    2.2 miR-497-5p通過靶向調(diào)控NLRP1抑制炎癥反應(yīng)
    2.3 miR-497-5p促進(jìn)膽固醇流出降低細(xì)胞脂質(zhì)蓄積
3 討 論



本文編號：3820478