[背景與目的]:動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是冠心病、心肌梗死和腦梗死等心腦血管疾病的共同病理學(xué)基礎(chǔ),其中脂質(zhì)代謝紊亂是AS發(fā)生發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素,嚴(yán)重危害人類健康。新近流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)甘油三酯(triglycerides,TG)是AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,其引發(fā)的高甘油三酯血癥能促進(jìn)AS發(fā)生發(fā)展。近年來,國內(nèi)外大量研究表明micro RNAs在脂質(zhì)代謝和AS發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。本課題組先前研究證實(shí)mi R-186、mi R-134、mi R-467b等多種micro RNAs參與巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積和炎癥反應(yīng)。MiR-377作為一個(gè)多功能的micro RNA,它參與炎癥、氧化應(yīng)激和血管生成,并與心肌再生關(guān)系密切。更為重要的是,有研究報(bào)道m(xù)i R-377與體內(nèi)脂質(zhì)水平具有一定相關(guān)性,這表明循環(huán)mi R-377可能在調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)代謝過程中扮演重要角色。并且,目前尚無相關(guān)研究報(bào)道m(xù)i R-377在AS發(fā)生發(fā)展過程中的作用。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1(DNA methyltransferases 1,DNMT1)屬于DNMTs家族。作為最重要的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶,DNMT1在...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要縮略語中英文索引
第1章 緒論
第2章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 MICRORNA公共數(shù)據(jù)庫及在線軟件
    2.3 主要實(shí)驗(yàn)器材與實(shí)驗(yàn)儀器
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 收集整理臨床資料
        3.1.1 統(tǒng)計(jì)患者信息
        3.1.2 采集血液標(biāo)本
    3.2 實(shí)時(shí)定量PCR(REALTIME-QUANTITATIVEPCR,RT-QPCR)
    3.3 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)
        3.3.1 MIR-377序列、基因定位及保守性
        3.3.2 MicroRNA靶基因預(yù)測(cè)
        3.3.3 MicroRNA.org網(wǎng)站預(yù)測(cè)
        3.3.4 MiR-377與DNMT13’-UTR結(jié)合自由能
        3.3.5 GPIHBP1啟動(dòng)子區(qū)域序列
        3.3.6 GPIHBP1啟動(dòng)子區(qū)域甲基化情況
    3.4 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.5 細(xì)胞蛋白抽提
    3.6 BCA蛋白定量
    3.7 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)(WESTERNBLOT)
    3.8 雙熒光素酶報(bào)告基因構(gòu)建與分析
    3.9 DNMT1活性檢測(cè)
    3.10 亞硫酸鹽測(cè)序
    3.11 LPL與GPIHBP1結(jié)合試驗(yàn)
    3.12 APOE^-/-小鼠的飼養(yǎng)與動(dòng)物模型的構(gòu)建
    3.13 動(dòng)物組織取材
    3.14 小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞提取
    3.15 HE染色
    3.16 油紅O染色
    3.17 MASSON染色
    3.18 統(tǒng)計(jì)分析
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 CHD患者血清中各種MICRORNAS表達(dá)情況
        4.1.1 臨床患者分組
        4.1.2 CHD合并高脂血癥患者血清中MICRORNAS表達(dá)水平
        4.1.3 CHD合并高甘油三酯血癥患者血清中MIR-145、MIR-377和MIR-410表達(dá)水平
    4.2 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)MIR-377與DNMT1特異性結(jié)合
        4.2.1 不同物種間MIR-377序列高度保守
        4.2.2 MIR-377能與DNMT13’-UTR特異性結(jié)合
        4.2.3 MIR-377與GPIHBP1、LPL無特異性結(jié)合作用
    4.3 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)MIR-377與DNMT1特異性結(jié)合
        4.3.1 MIR-377與DNMT1特異性結(jié)合
        4.3.2 MIR-377不能和GPIHBP1、LPL特異性結(jié)合
    4.4 MIR-377抑制細(xì)胞內(nèi)DNMT1的表達(dá)和活性
        4.4.1 MIR-377抑制細(xì)胞內(nèi)DNMT1活性
        4.4.2 MIR-377呈現(xiàn)濃度依賴性抑制DNMT1表達(dá)
        4.4.3 MIR-377呈現(xiàn)時(shí)間依賴性抑制DNMT1表達(dá)
    4.5 DNMT1促進(jìn)GPIHBP1啟動(dòng)子DNA甲基化而抑制其表達(dá)
        4.5.1 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)GPIHBP1啟動(dòng)子區(qū)域CPG島序列
        4.5.2 DNMT1促進(jìn)GPIHBP1啟動(dòng)子DNA甲基化
        4.5.3 DNMT1抑制GPIHBP1表達(dá)
    4.6 MIR-377上調(diào)GPIHBP1表達(dá)并增加其與LPL結(jié)合量
        4.6.1 MIR-377抑制DNMT1降低GPIHBP1啟動(dòng)子甲基化水平
        4.6.2 MIR-377抑制DNMT1上調(diào)GPIHBP1表達(dá)
        4.6.3 MIR-377抑制DNMT1增加GPIHBP1與LPL結(jié)合量
    4.7 MIR-377降低APOE^-/-小鼠血漿甘油三酯水平
        4.7.1 MIR-377降低主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中DNMT1表達(dá)及活性
        4.7.2 MIR-377升高主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中GPIHBP1表達(dá)
        4.7.3 MIR-377增加主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞表面GPIHBP1與LPL結(jié)合量
        4.7.4 MIR-377降低APOE^-/-小鼠血漿TG水平
    4.8 MIR-377抑制APOE^-/-小鼠AS斑塊形成
        4.8.1 MIR-377減少APOE^-/-小鼠主動(dòng)脈弓處斑塊面積
        4.8.2 MIR-377減少APOE^-/-小鼠主動(dòng)脈血管壁內(nèi)脂質(zhì)蓄積
        4.8.3 MIR-377減少APOE^-/-小鼠主動(dòng)脈瓣膜處AS斑塊形成
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文
致謝
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本文編號(hào)：3811624