目的:探究PSGL-1通過炎癥反應(yīng)在小鼠鹽敏感性高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用及分子機(jī)制。方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將PSGL-1基因敲除(PSGL-1-/-)小鼠及其野生型(PSGL-1+/+)小鼠,分別給予高鹽(6%NaCl)和正常鹽(0.4%NaCl)喂養(yǎng)三個(gè)月,麻醉狀態(tài)下頸總動(dòng)脈插管測(cè)量小鼠血壓,利用流式細(xì)胞術(shù)、免疫組化、免疫熒光、Elisa和免疫印跡方法檢測(cè)小鼠組織中炎癥反應(yīng)、血管功能和腎臟損傷情況;體外實(shí)驗(yàn)一:分別提取PSGL-1+/+和PSGL-1-/-小鼠的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),并用BCECF-AM探針染色。小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞單層分別給予130 mM和170 mM NaCl刺激三小時(shí)后,加入探針標(biāo)記的PBMC細(xì)胞共孵育三十分鐘,用倒置熒光顯微鏡拍照對(duì)比各組熒光強(qiáng)度,即代表PBMC粘附數(shù)量;體外實(shí)驗(yàn)二:提取小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞,分別在130 mM和170 mMNaCl濃度環(huán)境中與小鼠P-selectin重組蛋白共孵育,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)與P-selectin重組蛋白結(jié)合的外周血單個(gè)核細(xì)胞的比例;體外實(shí)驗(yàn)三:將小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Bend.3)分別于130mMNaCl、170mM ...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞
第一部分 PSGL-1參與高鹽引起的血管內(nèi)皮損傷和靶器官損傷
    摘要
    Abstract
    引言
    材料和方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
            1.3 主要抗體及試劑
            1.4 主要試劑的配制
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 頸動(dòng)脈插管法檢測(cè)小鼠動(dòng)脈血壓[45]
            2.2 血管功能檢測(cè)
            2.3 免疫熒光法
            2.4 Elisa方法檢測(cè)外周血血清中內(nèi)皮素-1(ET-1)的表達(dá)量
            2.5 流式細(xì)胞術(shù)
            2.6 小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)—小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Bend.3)單層體外粘附作用
            2.7 免疫組化方法檢測(cè)小鼠皮膚小血管和腹主動(dòng)脈中炎癥細(xì)胞浸潤的檢測(cè)
            2.8 免疫印跡法檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平
            2.9 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的白細(xì)胞浸潤
            1.1 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的皮膚小血管炎癥細(xì)胞的浸潤
            1.2 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)-小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Bend.3)的體外粘附
            1.3 高鹽促進(jìn)白細(xì)胞表面的PSGL-1與P-selectin的結(jié)合
        2.PSGL-1對(duì)血管炎癥和血管功能的影響
            2.1 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的炎癥細(xì)胞在主動(dòng)脈中的浸潤
            2.2 PSGL-1影響血管內(nèi)皮eNOS的表達(dá)
            2.3 PSGL-1影響高鹽誘導(dǎo)的內(nèi)皮素-1的表達(dá)
            2.4 PSGL-1缺失抑制高鹽飲食誘導(dǎo)的血管舒張功能的下降
        3.PSGL-1缺失抑制腎臟炎癥反應(yīng)和腎臟損傷
            3.1 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的腎臟炎癥細(xì)胞浸潤
            3.2 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的腎臟氧化應(yīng)激和纖維化
        4.高鹽通過NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的粘附分子表達(dá)
    討論
    小結(jié)
第二部分 MiR-122通過TGFβ1/TGFβR1通路調(diào)控血管內(nèi)皮EndMT的發(fā)生
    摘要
    Abstract
    引言
    材料與方法
        1.實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 HE染色
            2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.4 油紅O染色
            2.5 RNA提取
            2.6 RT-PCR
            2.7 Real-time PCR
            2.8 免疫印跡法檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平
        3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.高脂飲食誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化小鼠中miR-122的表達(dá)
        2.血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生EndMT過程中miR-122表達(dá)水平的變化
        3.MiR-122影響EndMT的發(fā)生
        4.MiR-122抑制H₂O₂誘導(dǎo)的EndMT
        5.MiR-122在不同種屬中對(duì)TGFβ1/TGFβR1信號(hào)通路的調(diào)控差異性
    討論
    小結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷
致謝



本文編號(hào)：3810348