心血管疾病是我國臨床上的常見病,極易發(fā)展為危重病。心血管疾病的早期診斷需要結(jié)合臨床癥狀,心電圖,心肌損傷標(biāo)志物檢測等方面進(jìn)行判斷。標(biāo)志物檢測是臨床非入侵性診斷的重要方法之一。肌紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白分別是目前心肌損傷患者早期診斷標(biāo)志物和急性時相反應(yīng)標(biāo)志物,hMYO和hTRF的準(zhǔn)確定量有助于心血管疾病病人的早期診斷和病程判斷。臨床上蛋白質(zhì)標(biāo)志物一般采用免疫分析的方法進(jìn)行定量,因此相比蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度或摩爾濃度,其免疫活性濃度成為保障檢測結(jié)果準(zhǔn)確可比的關(guān)鍵,而從源頭上建立一種準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)免疫活性濃度絕對定量方法成為建立蛋白質(zhì)免疫活性濃度精準(zhǔn)“標(biāo)尺”的核心。近年來發(fā)展起來的基于分子相互作用的無標(biāo)濃度分析方法(Calibration Free Concentration Analysis,CFCA)能夠滿足蛋白質(zhì)免疫活性濃度直接準(zhǔn)確定量的目的,該方法基于特定單克隆抗體與蛋白質(zhì)的相互作用而無需外部標(biāo)準(zhǔn)品即可準(zhǔn)確測定能夠與抗體結(jié)合的抗原濃度。本文通過研究肌紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白兩種心肌標(biāo)志物的免疫活性濃度準(zhǔn)確定量方法,對于保證心肌診斷標(biāo)志物檢測結(jié)果準(zhǔn)確可比、指導(dǎo)心肌損傷的早期診斷和后續(xù)治療具有重要意義。首先,...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 心肌損傷標(biāo)志物
        1.1.1 心肌損傷標(biāo)志物及其應(yīng)用
        1.1.2 肌紅蛋白及其檢測方法
        1.1.3 人轉(zhuǎn)鐵蛋白及其檢測方法
    1.2 蛋白定量方法的現(xiàn)狀
        1.2.1 非免疫學(xué)分析方法
            1.2.1.1 液相色譜法
            1.2.1.2 液相色譜質(zhì)譜法(LC-MS)
            1.2.1.3 同位素稀釋質(zhì)譜法(IDMS)
            1.2.1.4 毛細(xì)管電泳法
        1.2.2 免疫學(xué)方法
            1.2.2.1 酶聯(lián)免疫檢測法(ELISA)
            1.2.2.2 免疫熒光法
            1.2.2.3 免疫膠體金法
            1.2.2.4 Western blot法
    1.3 表面等離子體共振技術(shù)(SPR)
        1.3.1 表面等離子體共振技術(shù)光學(xué)原理
        1.3.2 表面等離子體共振技術(shù)定量原理
            1.3.2.1 無標(biāo)定量法
        1.3.3 表面等離子體共振技術(shù)的應(yīng)用
            1.3.3.1 表面等離子共振技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.3.3.2 表面等離子共振技術(shù)在食品檢測領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.3.3.3 表面等離子共振技術(shù)在環(huán)境化工領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.3.3.4 表面等離子共振技術(shù)與其他技術(shù)的聯(lián)用
    1.4 課題提出
第二章 基于SPR的人心肌紅蛋白免疫活性濃度絕對測定方法研究
    2.1 試劑與儀器
        2.1.1 試劑
        2.1.2 儀器
    2.2 實驗部分
        2.2.1 純度測定
        2.2.2 圓二色譜鑒定蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)
        2.2.3 蛋白質(zhì)鑒定
        2.2.4 肌紅蛋白分子量測定及擴(kuò)散系數(shù)計算
        2.2.5 肌紅蛋白總蛋白定量
        2.2.6 無標(biāo)定量法測定肌紅蛋白含量
            2.2.6.1 定量原理
            2.2.6.2 抗體偶聯(lián)
            2.2.6.3 芯片再生溶液篩選
            2.2.6.4 肌紅蛋白樣品的制備
            2.2.6.5 肌紅蛋白的無標(biāo)定量分析
            2.2.6.6 動力學(xué)研究
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 凝膠排阻色譜純度結(jié)果
        2.3.2 圓二色譜檢測二級結(jié)構(gòu)
        2.3.3 蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果
        2.3.4 MALDI-TOF分子量測定結(jié)果及擴(kuò)散系數(shù)
        2.3.5 肌紅蛋白IDMS測定結(jié)果
        2.3.6 無標(biāo)定量法測定肌紅蛋白含量
            2.3.6.1 抗體稀釋液pH篩選結(jié)果
            2.3.6.2 芯片再生溶液篩選結(jié)果
            2.3.6.3 CFCA預(yù)試驗
            2.3.6.3 抗體偶聯(lián)水平優(yōu)化
            2.3.6.4 CFCA法測定結(jié)果
            2.3.6.5 重復(fù)性和再現(xiàn)性
            2.3.6.6 動力學(xué)考察
    2.4 結(jié)論
第三章 基于SPR的人血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫活性濃度絕對測定方法研究
    3.1 試劑與儀器
        3.1.1 試劑
        3.1.2 儀器
    3.2 實驗部分
        3.2.1 轉(zhuǎn)鐵蛋白分子量測定及擴(kuò)散系數(shù)計算
        3.2.2 抗體偶聯(lián)pH篩選
        3.2.3 抗體偶聯(lián)濃度及芯片偶聯(lián)
        3.2.4 再生溶液篩選
        3.2.5 人血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白樣品的制備
        3.2.6 人血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白樣品的無標(biāo)定量分析
        3.2.7 純品轉(zhuǎn)鐵蛋白樣品的無標(biāo)定量分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 MALDI-TOF分子量測定結(jié)果及擴(kuò)散系數(shù)
        3.3.2 人血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白生化分析儀測定結(jié)果
        3.3.3 抗體稀釋液pH篩選結(jié)果
        3.3.4 抗體稀釋濃度篩選結(jié)果及芯片偶聯(lián)
        3.3.5 芯片再生溶液篩選結(jié)果
        3.3.6 人血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白定量預(yù)試驗
        3.3.7 人血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白樣品的無標(biāo)定量分析
        3.3.8 純品轉(zhuǎn)鐵蛋白樣品的無標(biāo)定量分析
    3.4 結(jié)論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
作者和導(dǎo)師簡介
附件



本文編號：3785423