肥厚型心肌病(Hypertrophic cardiomyopathy, HCM)是一種以左心室及室間隔不對稱肥厚為基本特征的原發(fā)性心肌病,其發(fā)病率約為0.2%,是青少年及運動員心源性猝死(SCD)的主要原因。 本研究篩選到一個具有母系遺傳特征的肥厚型心肌病家系。該家系所有母系成員(4/4)均患病,二維超聲心動圖(ECHO)檢測顯示其最大左心室壁厚度(MLVWT)從26.8mm至46.6mm,室間隔厚度／左心室后壁厚度(IVS/LPW)從2.86到3.99,具有典型的肥厚型心肌病特征。該家系母系成員同時伴有完全性房室傳導阻滯(AVB),先證者還出現(xiàn)左心室重構,導致肥厚型心肌病向擴張型心肌病(DCM)轉(zhuǎn)化。 通過對該家系母系成員的線粒體DNA (mitochondrial DNA, mtDNA)進行全序列PCR擴增并測序,發(fā)現(xiàn)了一個新的16SrRNA2336T>C突變該突變進化保守性指數(shù)高達94.1%,不存在于2704個對照個體(http://www.genpat.uu.se/mtDB)和350個正常漢族人群中。2336T>C突變破壞了16SrRNA第Ⅲ結構域莖環(huán)結構處的233...

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【學位級別】：博士

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致謝
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述：肥厚型心肌病(HCM)研究進展
    1.1 引言
    1.2 HCM的臨床癥狀和形態(tài)學特征
    1.3 HCM的流行病學特征
    1.4 HCM的分子遺傳學基礎
        1.4.1 HCM相關的核基因突變及其致病機理
        1.4.2 HCM相關的mtDNA突變及其致病機理
        1.4.3 HCM相關的修飾基因突變及其致病機理
    1.5 HCM的診斷與治療
        1.5.1 HCM的診斷
        1.5.2 HCM的治療
    1.6 結語與展望
第二章 母系遺傳性HCM家系的收集與臨床分析
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗樣品
        2.2.2 主要儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 臨床檢查
        2.3.2 HCM患者家族遺傳史的調(diào)查
    2.4 實驗結果
        2.4.1 母系遺傳性HCM家系的收集
        2.4.2 臨床表型分析
    2.5 討論
        2.5.1 該家系具有典型的HCM臨床表型
        2.5.2 AVB與HCM的遺傳相關性
第三章 母系遺傳性HCM相關線粒體DNA突變的篩查與分析
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗樣品
        3.2.2 實驗儀器及耗材
    3.3 實驗方法
        3.3.1 外周血采集
        3.3.2 外周血DNA提取
        3.3.3 mtDNA全序列PCR-測序
        3.3.4 毛囊細胞DNA的提取
        3.3.5 腔上皮細胞DNA的提取
        3.3.6 尿液細胞DNA的提取
        3.3.7 不同組織細胞中mtDNA突變的異質(zhì)性分析
        3.3.8 HCM相關核基因突變的篩查
    3.4 實驗結果
        3.4.1 母系遺傳性HCM相關mtDNA突變的篩查
C突變在正常漢族人群中發(fā)生頻率的分析">        3.4.2 2336T>C突變在正常漢族人群中發(fā)生頻率的分析
C突變的異質(zhì)性分析">        3.4.3 不同組織細胞中2336T>C突變的異質(zhì)性分析
C突變對16S rRNA級結構的影響">        3.4.4 2336T>C突變對16S rRNA級結構的影響
        3.4.5 HCM相關核基因突變的篩查
    3.5 討論
C突變對線粒體結構和功能的影響">第四章 16S rRNA2336T>C突變對線粒體結構和功能的影響
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗樣品
        4.2.2 實驗儀器及耗材
    4.3 實驗方法
        4.3.1 永生化淋巴細胞系的構建
        4.3.2 細胞倍增時間的測定
        4.3.3 細胞氧呼吸速率(OCR)的測定
        4.3.4 細胞ATP合成的測定
        4.3.5 細胞活性氧(ROS)產(chǎn)生的測定
        4.3.6 線粒體結構的電子顯微鏡觀察
    4.4 實驗結果
        4.4.1 患者特異性淋巴細胞系的構建
C突變對細胞倍增時間的影響">        4.4.2 2336T>C突變對細胞倍增時間的影響
C突變對線粒體氧消耗速率(OCR)的影響">        4.4.3 2336T>C突變對線粒體氧消耗速率(OCR)的影響
C突變對線粒體ATP合成的影響">        4.4.4 2336T>C突變對線粒體ATP合成的影響
C突變對活性氧(ROS)產(chǎn)生的影響">        4.4.5 2336T>C突變對活性氧(ROS)產(chǎn)生的影響
C突變對線粒體結構的影響">        4.4.6 2336T>C突變對線粒體結構的影響
    4.5 討論
C突變對線粒體基因表達的影響">第五章 16S rRNA2336T>C突變對線粒體基因表達的影響
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 實驗樣品
        5.2.2 實驗儀器及耗材
    5.3 實驗方法
        5.3.1 mtDNA拷貝數(shù)的分析
        5.3.2 線粒體核糖體RNA和核糖體結合蛋白轉(zhuǎn)錄水平分析
        5.3.3 細胞總蛋白的提取及定量
        5.3.4 線粒體的分離與純化
        5.3.5 線粒體蛋白質(zhì)的SDS-PAGE/Western blot分析
    5.4 實驗結果
C突變對mtDNA拷貝數(shù)的影響">        5.4.1 2336T>C突變對mtDNA拷貝數(shù)的影響
C突變對線粒體16S rRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響">        5.4.2 2336T>C突變對線粒體16S rRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響
C突變對線粒體外膜蛋白表達的影響">        5.4.3 2336T>C突變對線粒體外膜蛋白表達的影響
C對mtDNA編碼OXPHOS復合體亞基蛋白表達的影響">        5.4.4 2336T>C對mtDNA編碼OXPHOS復合體亞基蛋白表達的影響
C對核基因編碼OXPHOS復合體亞基蛋白表達的影響">        5.4.5 2336T>C對核基因編碼OXPHOS復合體亞基蛋白表達的影響
C突變對線粒體核糖體大亞基結合蛋白基因表達的影響">        5.4.6 2336T>C突變對線粒體核糖體大亞基結合蛋白基因表達的影響
    5.5 討論
第六章 論文創(chuàng)新性
第七章 存在問題與展望
參考文獻
附錄Ⅰ：主要試劑的配制方法
附錄Ⅱ：常用英文縮寫
附錄Ⅲ：個人簡歷



本文編號：3768356