發(fā)布時(shí)間：2023-03-12 18:47

　　目的本研究旨在探究lncRNA XXYLT1-AS2(XXYLT1-AS2)在動(dòng)脈粥樣硬化內(nèi)皮功能障礙中作用和機(jī)制,探索其作為動(dòng)脈粥樣硬化臨床靶向治療靶點(diǎn)的潛在可能性。方法(1)使用生物信息學(xué)方法分析GEO數(shù)據(jù)庫,獲取差異性表達(dá)的基因,構(gòu)建頸動(dòng)脈球囊損傷大鼠模型,通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析(RealTime Quantitative PCR,RT-qPCR)鑒定目的基因XXYLT1-AS2的物種保守性,檢測(cè)在細(xì)胞系和大鼠球囊損傷模型頸動(dòng)脈中的表達(dá);(2)構(gòu)建XXYLT1-AS2過表達(dá)物及抑制物,使用CCK8、EdU和細(xì)胞劃痕的實(shí)驗(yàn)方法細(xì)胞水平檢測(cè)lncRNA對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖和遷移的影響;(3)通過Western blot、單核細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)和RT-qPCR等方法檢測(cè)在腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎性刺激下XXYLT...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    1.2 實(shí)驗(yàn)耗材與試劑
    1.3 實(shí)驗(yàn)試劑配制
        1.3.1 配制DMEM-F12培養(yǎng)基
        1.3.2 配制DMEM-1640培養(yǎng)基
        1.3.3 配制胰蛋白酶
        1.3.4 配制PBS緩沖液
        1.3.5 配制DEPC水
        1.3.6 配制Western blot有關(guān)的緩沖液
        1.3.7 蛋白電泳濃縮膠 5%聚丙烯酰胺凝膠(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)
        1.3.8 蛋白電泳分離膠 12% PAGE 配制如表 1.2 所示。
        1.3.9 配制FISH實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑
    1.4 頸動(dòng)脈球囊損傷模型大鼠培養(yǎng)
    1.5 臨床樣本的獲取
    1.6 數(shù)據(jù)集分析
    1.7 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
        1.7.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        1.7.2 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        1.7.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    1.8 RNA提取和測(cè)定
    1.9 RNA逆轉(zhuǎn)錄和RT-q PCR
        1.9.1 RNA逆轉(zhuǎn)錄
        1.9.2 熒光實(shí)時(shí)定量PCR(RT-q PCR)反應(yīng)
    1.10 蛋白提取及Western blot
        1.10.1 蛋白提取
        1.10.2 BCA法測(cè)定細(xì)胞蛋白濃度
        1.10.3 Western blot實(shí)驗(yàn)
    1.11 CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    1.12 EDU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    1.13 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
    1.14 單核細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)
    1.15 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    1.16 熒光原位雜交(FISH)實(shí)驗(yàn)
    1.17 下游靶蛋白預(yù)測(cè)
    1.18 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)
    1.19 RNA pull-down實(shí)驗(yàn)
    1.20 質(zhì)粒的鑒定和提取
        1.20.1 質(zhì)粒的鑒定
        1.20.2 質(zhì)粒的提取
    1.21 免疫組化實(shí)驗(yàn)
    1.22 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.1 lnc RNA-XXYLT1-AS2 的鑒別和特征
    2.2 XXYLT1-AS2 抑制臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移
    2.3 XXYLT1-AS2 抑制炎癥因子的表達(dá)和AKT/ NF-κB通路
    2.4 XXYLT1-AS2靶向結(jié)合RNA結(jié)合蛋白FUS
    2.5 FUS參與調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和粘附
    2.6 病理?xiàng)l件下,XXYLT1-AS2 通過靶向FUS調(diào)控細(xì)胞的增殖和遷移
    2.7 動(dòng)脈粥樣硬化和頸動(dòng)脈球囊損傷大鼠XXYLT1-AS2和FUS表達(dá)降低
    2.8 XXYLT1-AS2 參與動(dòng)脈粥樣硬化過程的潛在調(diào)控示意圖
3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表(附錄)
致謝



本文編號(hào)：3761755