目的:現(xiàn)有的大量流行病學(xué)證據(jù)肯定了脂聯(lián)素(adiponectin,APN)的心血管保護作用,包括心肌保護、促血管生成、抗炎、抗動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)作用。本研究通過建立脂多糖(lipopolysaccharide LPS)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥損傷模型,探究APN是否通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞自噬水平發(fā)揮抗AS作用,進而為臨床抗AS治療提供新思路。方法:1.第一部分,體外培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞經(jīng)LPS誘導(dǎo)后,采用Cell Counting Kit(CCK-8)檢測細(xì)胞的存活率,通過蛋白質(zhì)印跡方法(Western blot,WB)檢測不同作用時間點細(xì)胞自噬水平。實驗分組:(1)對照組,細(xì)胞正常培養(yǎng),未進行LPS誘導(dǎo)處理;(2)細(xì)胞經(jīng)LPS(100ng/ml)誘導(dǎo)6h;(3)細(xì)胞經(jīng)LPS(100ng/ml)誘導(dǎo)12h;(4)細(xì)胞經(jīng)LPS(100ng/ml)誘導(dǎo)24h。2.第二部分實驗,結(jié)合第一部分實驗的結(jié)果選擇細(xì)胞自噬明顯時間點,使用WB方法觀察APN對LPS誘導(dǎo)后巨噬細(xì)胞自噬水平的影響,用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)法測定炎癥因子(IL-1β、IL-6和TNF-α...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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前言
第一部分 觀察LPS誘導(dǎo)后巨噬細(xì)胞存活率及自噬水平的變化
    1 材料與方法
        1.1 實驗細(xì)胞
        1.2 主要試劑及耗材
        1.3 主要儀器
        1.4 主要溶液
        1.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.6 使用CCK-8 檢測LPS對巨噬細(xì)胞的毒性
        1.7 免疫印跡法測定自噬蛋白表達(dá)水平
        1.8 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 LPS誘導(dǎo)RAW264.7 后細(xì)胞存活率檢測
        2.2 LPS誘導(dǎo)RAW264.7 后細(xì)胞自噬水平增加
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 脂聯(lián)素對LPS誘導(dǎo)RAW264.7 巨噬細(xì)胞后炎癥水平及自噬水平的影響
    1 材料與方法
        1.1 主要抗體、試劑及耗材
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑配制
        1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.5 LPS誘導(dǎo)RAW264.7 炎癥模型
        1.6 ELISA法檢測LPS誘導(dǎo)后RAW264.7巨噬細(xì)胞IL-1β，IL-6，TNF-α水平
        1.7 Western blot檢測自噬蛋白的表達(dá)
        1.8 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 脂聯(lián)素對LPS誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞IL-1β，IL-6，TNF-α濃度的影響
        2.2 APN可使LPS誘導(dǎo)后的RAW264.7 后巨噬細(xì)胞自噬水平降低
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 脂聯(lián)素通過PI3K/Akt/mTOＲ通路影響LPS誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞的自噬水平
    1 材料與方法
        1.1 主要抗體、試劑及耗材
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑配制
        1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.5 LPS誘導(dǎo)RAW264.7 炎癥模型
        1.6 Western blot檢測自噬蛋白、通路蛋白的表達(dá)
        1.7 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
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本文編號：3753771