目的:探討miRNA-30a是否通過影響Th17細胞分化參與ITP發(fā)病;通過對miRNA-30a預測靶基因SOCS3的驗證,進一步探討miRNA-30a參與ITP發(fā)病的可能機制。方法:建立慢性ITP小鼠模型,檢測其脾臟單個核細胞中miRNA-30a、 RoRγt的表達并分析兩者相關性;構(gòu)建含靶基因mRNA 3′UTR的熒光素酶表達載體及含有miRNA的綠色熒光載體,通過Luciferase熒光檢測、實時熒光定量PCR(qPCR)、Western blot驗證SOCS3是否為miRNA-30a的靶基因。結(jié)果:實驗組小鼠血小板計數(shù)在注射抗小鼠血小板血清(APS)48 h后下降至正常的20%,且至少可維持14 d。實驗組小鼠脾臟單個核細胞中miRNA-30a及RoRγt表達較對照組升高(P<0.05),且兩者存在正性相關(r=0.54)。pMDH-GFP-miRNA-30a與pMIR-report-UTR實驗組的熒光素酶的活性明顯低于pMDH-GFP空質(zhì)粒與pMIR-report-UTR的對照組(P <0.05)。轉(zhuǎn)染miRNA-30a質(zhì)粒的EL4細胞中SOCS3在mRNA及蛋白...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    實驗動物
    試劑與儀器
    慢性ITP小鼠模型構(gòu)建
    小鼠脾臟單個核細胞制備
    293T細胞培養(yǎng)
    雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>    脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
    慢病毒制備
    EL4細胞的慢病毒轉(zhuǎn)染
    統(tǒng)計學分析
結(jié)果
    慢性ITP小鼠模型建立
    實驗組與對照組小鼠脾臟單個核細胞中miRNA-30a及RORγt的表達
    miRNA-30a與RORγt表達的相關性分析
    miRNA-30a表達質(zhì)粒（PMDH-GFP-miRNA-30a）及miRNA-30a報告質(zhì)粒（pMIR-report-UTR）構(gòu)建及驗證
    慢病毒轉(zhuǎn)染EL4細胞實驗
    靶基因驗證
討論



本文編號：3751001