背景：高膽固醇血癥是動脈粥樣硬化斑塊形成和發(fā)展的危險因子之一，雄激素受體作為膽固醇合成相關基因最重要的核轉錄調(diào)控因子，被證實很可能通過與死亡結構域相關蛋白相互結合而喪失轉錄激活功能，但其具體分子機制還有待進一步驗證。 目的：為了證實在HepG2細胞中DAXX可以與AR相互結合并抑制其轉錄調(diào)控的膽固醇合成相關基因的轉錄。 方法：穩(wěn)定轉染pCDNA3.1（+）/DAXX至體外培養(yǎng)的HepG2細胞中，終濃度為1μmol/L的丙酸睪酮處理DAXX過表達的HepG2細胞24h，采用siRNA耗干擾竭內(nèi)源性DAXX，采用免疫共沉淀法檢測DAXX與AR的相互結合，應用油紅O染色法、酶偶聯(lián)比色法和高效液相法檢測細胞中總膽固醇的含量，Western Blotting和RT-qPCR法檢測AR、SREBP-2和HMGCR的表達水平。 結果：在HepG2細胞中DAXX和AR可以相互結合，但并不影響AR的轉錄表達；外源性DAXX過表達的HepG2細胞中總膽固醇的含量顯著降低，胞內(nèi)SREBP-2和HMGCR的表達明顯被抑制；DAXX能夠有效的阻遏丙酸睪酮對膽固醇合成的促進作用，并伴隨著SREB... 

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

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主要英文縮略語索引
摘要
ABSTRACT
引言
實驗材料與試劑
    1. 主要實驗儀器
    2. 主要實驗耗材
    3. 主要材料與試劑
實驗方法
    1. 實驗主要溶液配制
    2. 質(zhì)粒擴增與提取
    3. 細胞培養(yǎng)與穩(wěn)定轉染
    4. Western Blot
    5. 實時熒光定量 PCR(RT-qPCR)
    6. 免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）
    7. 酶偶聯(lián)比色法
    8. 高效液相色譜法
    9. 油紅 O 染色
實驗結果
    1. Western Blot 和 RT-PCR 鑒定穩(wěn)定轉染后 DAXX 的蛋白表達水平
    2. 免疫共沉淀法證實 DAXX 可以與 AR 相互結合
    3. 穩(wěn)定轉染 DAXX 后 HepG2細胞中膽固醇的含量下降
    4. 外源性 DAXX 高表達不會影響內(nèi)源性 AR 的表達
    5. 過表達的外源性 DAXX 顯著抑制 SREBP-2 的轉錄
    6. 過表達的外源性 DAXX 顯著抑制 HMGCR 的轉錄
    7. AXX 能夠阻斷 TP 對 HepG2細胞膽固醇合成的激動作用
    8. TP 對 HepG2細胞中 AR 的蛋白表達沒有明顯影響
    9. DAXX 可以阻斷 TP 上調(diào) SREBP-2 的轉錄表達
    10. DAXX 可以阻斷 TP 上調(diào) HMGCR 的轉錄表達
    11. Western Blot 和 RT-PCR 鑒定瞬時轉染 siRNA-DAXX 后胞內(nèi)DAXX 的表達水平
    12.干擾內(nèi)源性 DAXX 對 HepG2細胞中 AR 表達影響甚微
    13.干擾內(nèi)源性 DAXX 后胞內(nèi) SREBP-2 的表達上調(diào)
    14.干擾內(nèi)源性 DAXX 后 HMGCR 的表達上調(diào)
討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
發(fā)表文章
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Daxx與雄激素受體結合的功能片段篩選[J]. 庹勤慧,徐桂娜,郭琰,朱炳陽,廖端芳.  中國動脈硬化雜志. 2010(12)
[2]Daxx通過上調(diào)caveolin-1的表達介導Ox-LDL誘導巨噬細胞膽固醇蓄積和凋亡（英文）[J]. 賀慶芝,庹勤慧,曾懷才,朱炳陽,讓蔚清,唐小卿,廖端芳.  生物化學與生物物理進展. 2010(08)
[3]Daxx過表達對氧化應激誘導的肝腫瘤細胞凋亡的影響（英文）[J]. 庹勤慧,熊國祚,朱炳陽,曹建國,廖端芳.  生物化學與生物物理進展. 2008(11)



本文編號：3725258