背景：高膽固醇血癥是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成和發(fā)展的危險(xiǎn)因子之一，雄激素受體作為膽固醇合成相關(guān)基因最重要的核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，被證實(shí)很可能通過與死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白相互結(jié)合而喪失轉(zhuǎn)錄激活功能，但其具體分子機(jī)制還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。 目的：為了證實(shí)在HepG2細(xì)胞中DAXX可以與AR相互結(jié)合并抑制其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的膽固醇合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。 方法：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pCDNA3.1（+）/DAXX至體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞中，終濃度為1μmol/L的丙酸睪酮處理DAXX過表達(dá)的HepG2細(xì)胞24h，采用siRNA耗干擾竭內(nèi)源性DAXX，采用免疫共沉淀法檢測DAXX與AR的相互結(jié)合，應(yīng)用油紅O染色法、酶偶聯(lián)比色法和高效液相法檢測細(xì)胞中總膽固醇的含量，Western Blotting和RT-qPCR法檢測AR、SREBP-2和HMGCR的表達(dá)水平。 結(jié)果：在HepG2細(xì)胞中DAXX和AR可以相互結(jié)合，但并不影響AR的轉(zhuǎn)錄表達(dá)；外源性DAXX過表達(dá)的HepG2細(xì)胞中總膽固醇的含量顯著降低，胞內(nèi)SREBP-2和HMGCR的表達(dá)明顯被抑制；DAXX能夠有效的阻遏丙酸睪酮對(duì)膽固醇合成的促進(jìn)作用，并伴隨著SREB... 

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
主要英文縮略語索引
摘要
ABSTRACT
引言
實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    1. 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2. 主要實(shí)驗(yàn)耗材
    3. 主要材料與試劑
實(shí)驗(yàn)方法
    1. 實(shí)驗(yàn)主要溶液配制
    2. 質(zhì)粒擴(kuò)增與提取
    3. 細(xì)胞培養(yǎng)與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
    4. Western Blot
    5. 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(RT-qPCR)
    6. 免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）
    7. 酶偶聯(lián)比色法
    8. 高效液相色譜法
    9. 油紅 O 染色
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. Western Blot 和 RT-PCR 鑒定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后 DAXX 的蛋白表達(dá)水平
    2. 免疫共沉淀法證實(shí) DAXX 可以與 AR 相互結(jié)合
    3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 DAXX 后 HepG2細(xì)胞中膽固醇的含量下降
    4. 外源性 DAXX 高表達(dá)不會(huì)影響內(nèi)源性 AR 的表達(dá)
    5. 過表達(dá)的外源性 DAXX 顯著抑制 SREBP-2 的轉(zhuǎn)錄
    6. 過表達(dá)的外源性 DAXX 顯著抑制 HMGCR 的轉(zhuǎn)錄
    7. AXX 能夠阻斷 TP 對(duì) HepG2細(xì)胞膽固醇合成的激動(dòng)作用
    8. TP 對(duì) HepG2細(xì)胞中 AR 的蛋白表達(dá)沒有明顯影響
    9. DAXX 可以阻斷 TP 上調(diào) SREBP-2 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    10. DAXX 可以阻斷 TP 上調(diào) HMGCR 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    11. Western Blot 和 RT-PCR 鑒定瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 siRNA-DAXX 后胞內(nèi)DAXX 的表達(dá)水平
    12.干擾內(nèi)源性 DAXX 對(duì) HepG2細(xì)胞中 AR 表達(dá)影響甚微
    13.干擾內(nèi)源性 DAXX 后胞內(nèi) SREBP-2 的表達(dá)上調(diào)
    14.干擾內(nèi)源性 DAXX 后 HMGCR 的表達(dá)上調(diào)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
發(fā)表文章
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Daxx與雄激素受體結(jié)合的功能片段篩選[J]. 庹勤慧,徐桂娜,郭琰,朱炳陽,廖端芳.  中國動(dòng)脈硬化雜志. 2010(12)
[2]Daxx通過上調(diào)caveolin-1的表達(dá)介導(dǎo)Ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞膽固醇蓄積和凋亡（英文）[J]. 賀慶芝,庹勤慧,曾懷才,朱炳陽,讓蔚清,唐小卿,廖端芳.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2010(08)
[3]Daxx過表達(dá)對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的肝腫瘤細(xì)胞凋亡的影響（英文）[J]. 庹勤慧,熊國祚,朱炳陽,曹建國,廖端芳.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2008(11)



本文編號(hào)：3725258