動脈粥樣硬化是動脈壁的慢性炎癥過程,通過進行性斑塊的形成和動脈管腔的變窄引發(fā)心腦血管疾病。當斑塊破裂和血栓形成后,常見心血管疾病的表現(xiàn)為急性冠狀動脈綜合征、心肌梗死或中風。攜帶低密度脂蛋白（Low density lipoprotein,LDL）的載脂蛋白運載的循環(huán)性膽固醇水平提高,將促進動脈粥樣硬化和心血管疾病的發(fā)生。載脂蛋白結(jié)合細胞外基質(zhì)中負電性的蛋白聚糖引起LDL駐留在內(nèi)膜,更容易被活性氧或炎癥細胞所釋放的酶氧化生成氧化低密度脂蛋白（Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）。Ox-LDL觸發(fā)內(nèi)皮細胞粘附分子的表達和趨化因子的分泌,連同血小板趨化因子的沉積共同驅(qū)動內(nèi)膜免疫細胞浸潤。動脈壁LDL的沉積是動脈粥樣硬化病變的標志。氧化應激水平的提高促進LDL的氧化,ox-LDL通過多種機制參與動脈粥樣病變過程。其中,ox-LDL可以破壞內(nèi)皮細胞功能,而內(nèi)皮功能紊亂先于動脈粥樣硬化發(fā)生,是病變的早期事件。一氧化氮（Nitric oxide,NO）在調(diào)節(jié)血管功能方面發(fā)揮著重要功能,導致內(nèi)皮受損的主要因素之一是NO合成和/或生物利用度降低。Ox-LDL由... 

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略符號說明
第一章 緒論
    1.1 內(nèi)皮功能與心血管系統(tǒng)綜述
        1.1.1 NO功能與氧化應激
        1.1.2 內(nèi)皮功能紊亂與動脈粥樣硬化
        1.1.3 ox-LDL的促動脈粥樣硬化效應
    1.2 基于生物質(zhì)譜的蛋白組分析
        1.2.1 生物質(zhì)譜儀
        1.2.2 質(zhì)譜的碎裂方式
        1.2.3 基于質(zhì)譜的蛋白組定量研究方法
        1.2.4 蛋白組的質(zhì)譜分析策略
    1.3 翻譯后修飾
        1.3.1 翻譯后修飾的種類
        1.3.2 翻譯后修飾的功能
        1.3.3 翻譯后修飾的分析策略
    1.4 亞硝基化修飾
        1.4.1 亞硝基化的特點
        1.4.2 亞硝基化與去亞硝基化
        1.4.3 亞硝基化蛋白的功能
        1.4.4 亞硝基化的分析方法
    1.5 內(nèi)皮糖萼
        1.5.1 糖萼的結(jié)構(gòu)
        1.5.2 糖萼的功能
        1.5.3 糖胺聚糖的常用研究方法
        1.5.4 糖胺聚糖與蛋白的相互作用
    1.6 論文大綱
第二章 ox-LDL刺激下內(nèi)皮細胞的定量蛋白組學研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 試劑與耗材
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 色譜柱
        2.2.4 緩沖液及流動相的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)
        2.3.2 細胞凋亡試驗
        2.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2.3.4 蛋白酶解和TRAQ標記
        2.3.5 一維高pH反相色譜離線分離
        2.3.6 nanoLC-MS/MS分析
        2.3.7 數(shù)據(jù)處理
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 細胞凋亡
        2.4.2 氧化應激下內(nèi)皮細胞的蛋白組
        2.4.3 差異蛋白的功能富集分析
        2.4.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 ox-LDL刺激下內(nèi)皮細胞的亞硝基化修飾酶研究
    3.1 引言
    3.2 試劑與耗材
        3.2.1 試劑與耗材
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 緩沖液及流動相的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)
        3.3.2 NO定量檢測
        3.3.3 Real-time PCR
        3.3.4 Western blot
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 NO含量與eNOS表達量檢測
        3.4.2 總亞硝基化蛋白水平檢測
        3.4.3 GSNOR表達量檢測
    3.5 本章小結(jié)
第四章 ox-LDL刺激下內(nèi)皮細胞亞硝基化蛋白組的定量研究
    4.1 引言
    4.2 藥品與試劑
        4.2.1 試劑與耗材
        4.2.2 主要儀器
        4.2.3 色譜柱
        4.2.4 緩沖液及流動相的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)
        4.3.2 蛋白提取和濃度測定
        4.3.3 蛋白酶解
        4.3.4 亞硝基化肽段的富集
        4.3.5 iTRAQ標記
        4.3.6 nanoLC-MS/MS分析
        4.3.7 數(shù)據(jù)處理
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 亞硝基化位點的鑒定
        4.4.2 亞硝基化蛋白的相對定量
        4.4.3 亞硝基化蛋白的功能富集
        4.4.4 亞硝基化蛋白的相互作用網(wǎng)絡
        4.4.5 亞硝基化肽的分析
    4.5 本章小結(jié)
第五章 ox-LDL刺激下內(nèi)皮細胞硫酸乙酰肝素的表征
    5.1 引言
    5.2 藥品與試劑
        5.2.1 試劑與耗材
        5.2.2 主要儀器
        5.2.3 色譜柱
        5.2.4 緩沖液及流動相的配制
    5.3 實驗方法
        5.3.1 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)
        5.3.2 熒光檢測
        5.3.3 硫酸乙酰肝素的提取和純化
        5.3.4 LC-MRM MS分析
        5.3.5 電泳分析
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 硫酸乙酰肝素的熒光檢測
        5.4.2 硫酸乙酰肝素的結(jié)構(gòu)表征和含量測定
        5.4.3 硫酸乙酰肝素的分子量表征
    5.5 本章小結(jié)
第六章 ox-LDL刺激下內(nèi)皮細胞硫酸乙酰肝素結(jié)合蛋白的研究
    6.1 引言
    6.2 藥品與試劑
        6.2.1 試劑與耗材
        6.2.2 主要儀器
        6.2.3 緩沖液及流動相的配制
    6.3 實驗方法
        6.3.1 蛋白組芯片
        6.3.2 BLI測定
        6.3.3 免疫共定位
        6.3.4 細胞凋亡
    6.4 結(jié)果與討論
        6.4.1 硫酸乙酰肝素結(jié)合蛋白的篩選
        6.4.2 硫酸乙酰肝素結(jié)合蛋白的驗證
        6.4.3 關(guān)鍵硫酸乙酰肝素結(jié)合蛋白的篩選
        6.4.4 硫酸乙酰肝素對胎球蛋白內(nèi)吞的影響
        6.4.5 脫硫酸肝素與胎球蛋白的結(jié)合
        6.4.6 非抗凝肝素的保護作用
    6.5 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文及申請的專利
學術(shù)論文評閱及答辯情況表



本文編號：3705767