目的:短鏈�；o酶A脫氫酶（short-chain acyl-Co A dehydrogenase,SCAD）是線粒體脂肪酸β氧化的限速酶。前期研究顯示,PPARα介導了SCAD對心肌纖維化的調(diào)控作用。本文旨在研究PI3K/ERK1/2/NF-κB/PPARα/SCAD信號途徑對心肌纖維化的調(diào)控作用,闡明SCAD調(diào)控心肌纖維化的新機制。方法:1、采用自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）作為心肌纖維化模型,并進行游泳運動干預。Western blot檢測PI3K p110α、PI3K p110γ、p-ERK1/2、p-IκBα、p-p65蛋白表達變化。Western blot及Real-time PCR檢測SCAD、PPARα及纖維化指標α-SMA、Collagen I和Collagen III蛋白和m RNA水平。同時檢測SCAD酶活性、ATP含量及游離脂肪酸含量。2、采用血管緊張素II（angiotensin,Ang II）刺激原代培養(yǎng)正常大鼠的心肌成纖維細胞（cardiac fibroblasts,CFs）構(gòu)建心肌纖維化體外模型... 

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 心肌纖維化
    1.2 心臟能量代謝
    1.3 PI3K/NF-κB信號途徑的研究現(xiàn)狀
    1.4 ERK1/2/PPARα信號途徑的研究現(xiàn)狀
    1.5 SCAD研究現(xiàn)狀
    1.6 結(jié)語
    1.7 研究思路
第二章 PI3K/ERK1/2/NF-κB/PPARα/SCAD信號途徑在心肌纖維化動物模型中的表達變化及游泳運動的影響
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 主要藥物與試劑
        2.2.3 主要實驗儀器和器材
        2.2.4 主要試劑的配置
    2.3 實驗方法
        2.3.1 游泳運動
        2.3.2 大鼠尾動脈收縮壓檢測
        2.3.3 超聲心動圖
        2.3.4 心臟膠原形態(tài)檢查
        2.3.5 心肌組織Real-time PCR分析
        2.3.6 心肌組織蛋白Western blot分析
        2.3.7 心肌組織SCAD酶活性檢測
        2.3.8 心肌組織ATP含量的檢測
        2.3.9 心肌組織游離脂肪酸含量檢測
        2.3.10 心肌組織羥脯氨酸含量測定
        2.3.11 EMSA分析
        2.3.12 實驗分組
    2.4 統(tǒng)計學分析
    2.5 實驗結(jié)果
        2.5.1 各組大鼠血壓的變化
        2.5.2 各組大鼠超聲心動圖參數(shù)的變化
        2.5.3 各組大鼠心肌組織形態(tài)學變化
        2.5.4 各組大鼠心肌組織信號分子的表達變化及游泳運動的干預
        2.5.5 各組大鼠心肌組織能量代謝的變化及游泳運動的干預
        2.5.6 各組大鼠心肌組織PPARα蛋白質(zhì)與DNA探針結(jié)合活性的變化
    2.6 討論
第三章 PI3K/ERK1/2/NF-κB/PPARα/SCAD信號途徑在AngⅡ誘導的心肌成纖維細胞中的變化
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 主要藥物和試劑
        3.2.3 主要實驗儀器和器材
        3.2.4 主要試劑配置
    3.3 實驗方法
        3.3.1 原代心肌成纖維細胞培養(yǎng)
        3.3.2 心肌成纖維細胞Real-time PCR分析
        3.3.3 心肌成纖維細胞Western blot分析
        3.3.4 心肌成纖維細胞增殖率檢測
        3.3.5 心肌成纖維細胞SCAD酶活性檢測
        3.3.6 心肌成纖維細胞ATP含量檢測
        3.3.7 心肌成纖維細胞游離脂肪酸含量檢測
        3.3.8 心肌成纖維細胞羥脯氨酸含量檢測
        3.3.9 實驗分組
    3.4 統(tǒng)計學分析
    3.5 結(jié)果
        3.5.1 AngⅡ誘導的心肌成纖維細胞中信號分子的表達變化
        3.5.2 AngⅡ誘導的心肌成纖維細胞能量代謝和細胞增殖的變化
    3.6 討論
第四章 SCAD對心肌纖維化的作用受NF-κB調(diào)控
    4.1 前言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗動物
        4.2.2 主要試劑與藥物
        4.2.3 主要儀器和器械
        4.2.4 主要試劑配置
    4.3 實驗方法
        4.3.1 原代心肌成纖維細胞培養(yǎng)
        4.3.2 心肌成纖維細胞增值率檢測
        4.3.3 心肌成纖維細胞Real-time PCR分析
        4.3.4 心肌成纖維細胞Western blot分析
        4.3.5 心肌成纖維細胞SCAD酶活性檢測
        4.3.6 心肌成纖維細胞ATP含量檢測
        4.3.7 心肌成纖維細胞游離脂肪酸含量檢測
        4.3.8 心肌成纖維細胞羥脯氨酸含量檢測
        4.3.9 實驗分組
    4.4 統(tǒng)計學分析
    4.5 結(jié)果
        4.5.1 Maslinic acid對心肌成纖維細胞p-p65 表達的影響
        4.5.2 LPS與 Maslinic acid對 AngⅡ刺激的心肌成纖維細胞p-p65、PPARα及SCAD表達的影響
        4.5.3 LPS與 Maslinic acid對 AngⅡ刺激的心肌成纖維細胞能量代謝和細胞增殖的影響
    4.6 討論
第五章 SCAD對心肌纖維化的作用受ERK1/2 調(diào)控
    5.1 前言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 實驗動物
        5.2.2 主要試劑與藥物
        5.2.3 主要儀器和器械
        5.2.4 主要試劑配置
    5.3 實驗方法
        5.3.1 原代心肌成纖維細胞培養(yǎng)
        5.3.2 心肌成纖維細胞增值率檢測
        5.3.3 心肌成纖維細胞Real-time PCR分析
        5.3.4 心肌成纖維細胞Western blot分析
        5.3.5 心肌成纖維細胞SCAD酶活性檢測
        5.3.6 心肌成纖維細胞ATP含量檢測
        5.3.7 心肌成纖維細胞游離脂肪酸含量檢測
        5.3.8 心肌成纖維細胞羥脯氨酸含量檢測
        5.3.9 實驗分組
    5.4 統(tǒng)計學分析
    5.5 結(jié)果
        5.5.1 EGF與 PD98059對AngⅡ刺激的心肌成纖維細胞p-IκBα、p-p65、PPARα、SCAD表達的影響
        5.5.2 EGF與 PD98059對AngⅡ刺激的心肌成纖維細胞能量代謝和細胞增殖的影響
    5.6 討論
第六章 SCAD對心肌纖維化的作用受PI3K p110α/γ調(diào)控
    6.1 前言
    6.2 實驗材料
        6.2.1 實驗動物
        6.2.2 主要試劑與藥物
        6.2.3 主要儀器和器械
        6.2.4 主要試劑配置
    6.3 實驗方法
        6.3.1 原代心肌成纖維細胞培養(yǎng)
        6.3.2 心肌成纖維細胞增值率檢測
        6.3.3 心肌成纖維細胞Real-time PCR
        6.3.4 心肌成纖維細胞Western blot分析
        6.3.5 心肌成纖維細胞SCAD酶活性檢測
        6.3.6 心肌成纖維細胞ATP含量檢測
        6.3.7 心肌成纖維細胞游離脂肪酸含量檢測
        6.3.8 心肌成纖維細胞羥脯氨酸含量檢測
        6.3.9 實驗分組
    6.4 統(tǒng)計學分析
    6.5 結(jié)果
        6.5.1 不同濃度的A66 對心肌成纖維細胞PI3K p110α表達的影響
        6.5.2 A66對AngⅡ刺激的心肌成纖維細胞PI3K/ERK1/2/NF-κB/PPARα/SCAD信號途徑的影響
        6.5.3 A66對AngⅡ處理的心肌成纖維細胞能量代謝和細胞增殖的影響
        6.5.4 不同濃度的AS605240 對心肌成纖維細胞PI3K p110γ表達的影響
        6.5.5 AS605240對AngⅡ刺激心肌成纖維細胞PI3K/ERK1/2/NF-κB/PPARα/SCAD信號途徑的影響
        6.5.6 AS605240對AngⅡ刺激的心肌成纖維細胞能量代謝和細胞增殖的影響
    6.6 討論
總結(jié)與展望
    總結(jié)與創(chuàng)新
    不足與展望
參考文獻
致謝
附錄一 英文縮略詞表
附錄二 在碩士研究生期間完成的論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3694621