目的研究CD137-CD137L信號是否通過介導(dǎo)巨噬細胞基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的生成和活性,從而影響血管平滑肌細胞（VSMC）和動脈粥樣硬化鈣化的形成。方法1.體外實驗:采用巰基乙酸鹽腹腔灌洗提取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬細胞（PM）。采用組織塊貼壁法進行小鼠胸主動脈VSMC原代培養(yǎng)。構(gòu)建PM-VSMC共培養(yǎng)體系進行下一步實驗。實驗分成5組:（1）對照組（單獨培養(yǎng)VSMC）;（2）共培養(yǎng)組（PM-VSMC共培養(yǎng)）;（3）CD137L激動對照組（對照組+激動CD137-CD137L信號）;（4）CD137L激動共培養(yǎng)組（共培養(yǎng)組+激動CD137-CD137L信號）;（5）MMP-9抑制組（共培養(yǎng)抑制MMP-9+激動CD137-CD137L信號）。采用明膠酶譜法檢測MMP-9蛋白的活性。RT-PCR和Western blot分別檢測各組鈣化相關(guān)蛋白OPN、Runx-2的m RNA和蛋白表達水平。微量比色法測定各組鈣離子濃度及堿性磷酸酶（ALP）活性。Von Kossa和茜素紅染色觀察各組細胞鈣鹽沉積程度。2.體內(nèi)實驗:取6~8周齡Apo E-/-小鼠30只,隨機分為5組:（1）即... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
常用縮略詞對照表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的
    1.3 研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.3.1 研究內(nèi)容
        1.3.2 技術(shù)路線
    1.4 研究意義
第二章 CD137-CD137L信號誘導(dǎo)巨噬細胞MMP-9 生成
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 主要溶液及成分
        2.1.4 手術(shù)器械
        2.1.5 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠原代PM提取
        2.2.2 小鼠原代VSMC提取
        2.2.3 細胞培養(yǎng)及實驗干預(yù)
        2.2.4 細胞總蛋白的提取和濃度鑒定
        2.2.5 Western blot蛋白印跡
        2.2.6 明膠酶譜法
        2.2.7 細胞免疫熒光
        2.2.8 流式細胞術(shù)檢測細胞表面蛋白
        2.2.9 統(tǒng)計學(xué)方法
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 小鼠原代PM提取純度及形態(tài)鑒定
        2.3.2 CD137-CD137L信號對PM中 MMP-9 蛋白表達的影響
    2.4 討論
第三章 巨噬細胞MMP-9在CD137-CD137L信號調(diào)控的血管鈣化中的作用
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑及溶液成分
        3.1.2 實驗動物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 實驗分組
        3.2.2 RT-PCR檢測目的基因mRNA的表達水平
        3.2.3 鈣離子含量微量比色法測定
        3.2.4 ALP 活性微量比色法檢測
        3.2.5 Von Kossa 染色
        3.2.6 茜素紅染色
        3.2.7 建立ApoE~(-/-)小鼠AS模型及分組處理
        3.2.8 免疫組化染色
        3.2.9 統(tǒng)計學(xué)方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 抑制巨噬細胞MMP-9 減少CD137-CD137L信號誘導(dǎo)的VSMC鈣 化相關(guān)蛋白的表達
        3.3.2 抑制巨噬細胞MMP-9 降低CD137-CD137L信號誘導(dǎo)的VSMC離子濃度和ALP活性
        3.3.3 抑制巨噬細胞MMP-9 減輕CD137-CD137L信號誘導(dǎo)的VSMC化程度
        3.3.4 抑制巨噬細胞MMP-9 減輕CD137-CD137L信號誘導(dǎo)的ApoE-/-鼠主動脈斑塊及鈣化形成
    3.4 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻
第五章 綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3686759