目的: 探索H9c2心肌細(xì)胞在缺氧/復(fù)氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）條件下冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白（CIRP）的表達(dá)及其在心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷中所起的具體作用。 方法： （1）缺氧復(fù)氧的模型（95%N2和5%CO2）的建立，采用的是H9c2心肌細(xì)胞，在體外培養(yǎng)建成。 （2）檢測CIRP在缺氧/復(fù)氧過程中，mRNA及蛋白的表達(dá)概況，采用的是RT-PCR來檢測mRNA的表達(dá)，Western blot印跡法來檢測蛋白的表達(dá)，并要著重注意兩者在缺氧/復(fù)氧過程中表達(dá)最高的時間點(diǎn)，作為后續(xù)試驗(yàn)中缺氧復(fù)氧時間。 （3）缺氧復(fù)氧處理選擇在缺氧14h及復(fù)氧2h兩個時間點(diǎn)上進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)時共分為10組同時進(jìn)行，分別為： ①正常對照組； ②H/R組； ③CIRPsiRNA處理細(xì)胞組； ④CIRPsiRNA處理細(xì)胞+H/R組; ⑤陰性干擾處理細(xì)胞組； ⑥陰性干擾處理細(xì)胞+H/R組； ⑦CIRP過表達(dá)質(zhì)粒處理細(xì)胞組； ⑧CIRP過表達(dá)質(zhì)粒處理細(xì)胞+H/R組； ⑨空載質(zhì)粒處理細(xì)胞組； ⑩空載質(zhì)粒處理細(xì)胞... 

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞來源
        2.1.2 主要使用儀器
        2.1.3 主要購買試劑
        2.1.4 試劑配制
    2.2 方法
        2.2.1 H9c2 心肌細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 H9c2 心肌細(xì)胞 H/R 模型的建立
        2.2.3 貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.5 V-FITC 法檢測細(xì)胞凋亡率
        2.2.6 Western blot 操作步驟
        2.2.7 RT-PCR 操作步驟
        2.2.8 條帶灰度值分析
    2.3 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 缺氧時的結(jié)果
        3.1.1 CIRP 蛋白表達(dá)情況
        3.1.2 CIRP 的 mRNA 表達(dá)情況
        3.1.3 缺氧時細(xì)胞凋亡率的變化
    3.2 復(fù)氧時的相關(guān)結(jié)果
        3.2.1 復(fù)氧中 CIRP 的蛋白表達(dá)結(jié)果
        3.2.2 CIRP 的 mRNA 表達(dá)情況
    3.3 按預(yù)定時間缺氧復(fù)氧時的相關(guān)結(jié)果
        3.3.1 蛋白表達(dá)情況
        3.3.2 凋亡率變化
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 不足之處和展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]氧化應(yīng)激對乳鼠心肌細(xì)胞Sonic hedgehog表達(dá)的影響以及小鼠急性心肌梗塞模型的制備[D]. 肖青.廣州醫(yī)學(xué)院 2009



本文編號：3680700