本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-29a對心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的調(diào)控機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的心房顫動(Atrial fibrillation,AF)屬于快速型心律失常,在臨床上的發(fā)病幾率最高,其發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的分子機(jī)制是心血管疾病領(lǐng)域的研究重點。心房顫動的病理生理學(xué)基礎(chǔ)是心肌纖維化,其可導(dǎo)致心房顫動及其他心律失常的發(fā)生與持續(xù)。心臟微小RNAs是一類與心血管疾病密切相關(guān)的micro RNAs,已有相關(guān)研究表明,心肌纖維化與此類micro RNAs之間存在一定的相關(guān)關(guān)系。本實驗旨在檢測micro RNA-29a及其下游調(diào)控基因血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)在Sprague-Dawley大鼠心肌成纖維細(xì)胞中的表達(dá)變化,研究micro RNA-29a mimics和micro RNA-29a inhibitor對Sprague-Dawley大鼠心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響,探究micro RNA-29a在心房顫動心肌纖維化過程中潛在的分子機(jī)制。方法Sprague-Dawley大鼠腹部皮下注射異丙腎上腺素(ISO)造模,以制備Sprague-Dawley大鼠心肌纖維化模型。隨機(jī)將60只SPF級別雄性Sprague-Dawley大鼠分為空白組和實驗組,其中空白組30只,實驗組30只。實驗組給予腹部皮下注射ISO 10mg/kg?d,空白組給予等劑量生理鹽水腹部皮下注射,標(biāo)記并連續(xù)注射2周后人工處死,無菌環(huán)境下取出心臟,獲取各組離體心臟標(biāo)本并標(biāo)注記號。利用Lipofectamine?2000 Reagent試劑,將micro RNA-29a mimics和inhibitor及其陰性對照瞬時轉(zhuǎn)染進(jìn)大鼠心肌成纖維細(xì)胞,24~48 h后檢測各項相關(guān)指標(biāo)。用HE染色法和Masson染色法計算大鼠離體心臟標(biāo)本中的心肌纖維化程度及膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF);Quantitative Real time PCR檢測各組micro RNA-29a,Col1A1和VEGF-A的m RNA表達(dá)水平;Western blot法測定Col1A1和VEGF-A蛋白水平的表達(dá);MTT法檢測micro RNA-29a mimics和inhibitor對心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響。結(jié)果在體內(nèi)實驗中,與空白組對比,HE染色和Masson染色結(jié)果顯示實驗組中Sprague-Dawley大鼠離體心臟標(biāo)本間質(zhì)中出現(xiàn)明顯的膠原纖維增生。計算心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)對比空白組顯示出明顯的增加改變。在體外實驗中,分別與空白組和陰性對照組對比,micro RNA-29a的表達(dá)水平在瞬時轉(zhuǎn)染micro RNA-29a mimics組中則表達(dá)上調(diào),而在實驗組和瞬時轉(zhuǎn)染micro RNA-29a inhibitor組中表達(dá)降低;Col1A1的表達(dá)水平在瞬時轉(zhuǎn)染micro RNA-29a mimics組中則表達(dá)下調(diào),而在實驗組和瞬時轉(zhuǎn)染micro RNA-29a inhibitor組中表達(dá)上調(diào);VEGF-A的表達(dá)水平在瞬時轉(zhuǎn)染micro RNA-29a mimics組中則表達(dá)下調(diào),而在實驗組和瞬時轉(zhuǎn)染micro RNA-29a inhibitor組中表達(dá)上調(diào)。在瞬時轉(zhuǎn)染micro RNA-29a mimics處理后24h和48h檢測,發(fā)現(xiàn)心肌成纖維細(xì)胞的增殖活力在轉(zhuǎn)染組顯著降低;而瞬時轉(zhuǎn)染micro RNA-29a inhibitors 24和48 h后,心肌成纖維細(xì)胞增殖活力則明顯增強(qiáng)。結(jié)論皮下注射ISO能誘導(dǎo)Sprague-Dawley大鼠心肌發(fā)生明顯的心肌纖維化,心肌組織中micro RNA-29a的高表達(dá)可降低VEGF-A的表達(dá),從而抑制心肌纖維化的發(fā)生。micro RNA-29a mimics可明顯降低心肌成纖維細(xì)胞的增殖活性,micro RNA-29a inhibitor則明顯增強(qiáng)心肌成纖維細(xì)胞的增殖活性。這進(jìn)一步說明micro RNA-29a是心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的潛在靶點,從而成為心房顫動發(fā)生發(fā)展機(jī)制中的一個至關(guān)重要的分子信號,可以為預(yù)防心肌纖維化和延緩其相關(guān)疾病如心房顫動的進(jìn)展甚至逆轉(zhuǎn)其病理改變提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：心房顫動 心肌纖維化 心肌成纖維細(xì)胞 MicroRNA-29a ColA1 VEGF-A
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R541.7
【目錄】：

• 英文縮略詞表(Abbreviation)5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 1 引言10-12
• 2 材料與方法12-32
• 3 結(jié)果32-44
• 4 討論44-47
• 5 結(jié)論47
• 6 參考文獻(xiàn)47-52
• 附錄52-53
• 致謝53-54
• 綜述54-61
• 參考文獻(xiàn)58-61

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  本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-29a對心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的調(diào)控機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：367752