發(fā)布時(shí)間：2022-02-24 20:47

　　原發(fā)性高血壓是遺傳與環(huán)境因素相互作用而致的多基因遺傳性疾病,與該疾病相關(guān)或易感基因的研究備受關(guān)注。檢測原發(fā)性高血壓的易感基因可以發(fā)現(xiàn)潛在的疾病風(fēng)險(xiǎn),以便及早采取治療措施,降低原發(fā)性高血壓患者罹患重大心腦血管疾病（如腦卒中）的風(fēng)險(xiǎn)。目前,基因分型的方法包括PCR-RFLP、熒光PCR、基因測序和基因芯片等檢測技術(shù),這些技術(shù)操作步驟復(fù)雜,需要特殊的儀器設(shè)備,臨床樣本檢測周期較長。本研究選擇原發(fā)性高血壓候選易感基因ACE（I/D）和AGTR1（A1166C）為研究對象,結(jié)合四引物擴(kuò)增受阻突變PCR擴(kuò)增體系和側(cè)向流層析技術(shù),建立了一種快速的基因分型方法稱為T-ARMS-LFA,用以檢測評估原發(fā)性高血壓患病風(fēng)險(xiǎn)。該方法將四條引物加入一個(gè)PCR反應(yīng)管中,對應(yīng)一個(gè)層析試紙條的判讀,便可實(shí)現(xiàn)對單核苷酸多態(tài)性（AGTR1）或者基因缺失（ACE）,實(shí)現(xiàn)基因準(zhǔn)確分型。與金標(biāo)準(zhǔn)基因測序方法相比,檢測結(jié)果符合率為100%。針對ACE（I/D）基因分型,檢測靈敏度是25 ng,對于AGTR1（A1166C）的基因分型,檢測靈敏度是10 ng。以建立的T-ARMS-LFA對中國西北地區(qū)135例原發(fā)性高血壓患者和18... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省211工程院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對照表
第一章 緒論
    1.1 高血壓概述
        1.1.1 高血壓簡介
        1.1.2 原發(fā)性高血壓的病理生理學(xué)
        1.1.3 原發(fā)性高血壓的分子遺傳學(xué)
    1.2 基因多態(tài)性檢測方法概述
        1.2.1 限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)
        1.2.2 TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)
        1.2.3 DNA微陣列技術(shù)
        1.2.4 Sanger測序法
    1.3 金磁微粒概述
        1.3.1 金磁微粒的合成
        1.3.2 金磁微粒的應(yīng)用
    1.4 論文立題依據(jù)及主要工作
        1.4.1 研究目的及意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
        1.4.3 創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 ACE和AGTR1陽性質(zhì)控體系的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)原理
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 試劑的配制
        2.2.3 儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 克隆引物的設(shè)計(jì)
        2.3.2 目的基因組DNA片段的制備
        2.3.3 基因克隆
        2.3.4 陽性質(zhì)控體系的驗(yàn)證
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.4.1 克隆引物的設(shè)計(jì)
        2.4.2 目的基因組DNA片段的制備
        2.4.3 基因克隆
        2.4.4 陽性質(zhì)控體系的驗(yàn)證
    2.5 本章小結(jié)
第三章 ACE及AGTR1基因多態(tài)性檢測方法的建立
    3.1 實(shí)驗(yàn)原理
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 主要試劑
        3.2.2 主要儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 引物設(shè)計(jì)
        3.3.2 引物篩選
        3.3.3 基因分型方法的建立
        3.3.4 引物濃度的優(yōu)化
        3.3.5 退火溫度的優(yōu)化
        3.3.6 循環(huán)數(shù)的優(yōu)化
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.4.1 特異性引物的設(shè)計(jì)
        3.4.2 特異性引物的篩選
        3.4.3 基因分型方法的建立
        3.4.4 引物濃度的優(yōu)化
        3.4.5 退火溫度的優(yōu)化
        3.4.6 循環(huán)數(shù)的優(yōu)化
    3.5 本章小結(jié)
第四章 ACE及AGTR1基因多態(tài)性檢測方法的評價(jià)
    4.1 實(shí)驗(yàn)原理
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 試劑
        4.2.2 儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 準(zhǔn)確性評估
        4.3.2 重復(fù)性評估
        4.3.3 靈敏度評估
        4.3.4 臨床樣本評估
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.4.1 準(zhǔn)確性評估
        4.4.2 重復(fù)性評估
        4.4.3 靈敏度評估
        4.4.4 臨床樣本評估
    4.5 本章小結(jié)
第五章 ACE及AGTR1基因型與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究
    5.1 研究對象
    5.2 實(shí)驗(yàn)原理
    5.3 實(shí)驗(yàn)材料
        5.3.1 試劑
        5.3.2 儀器
    5.4 實(shí)驗(yàn)方法
        5.4.1 臨床樣本的收集
        5.4.2 ACE(I/D)及AGTR1(A1166C)基因多態(tài)性檢測
        5.4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.5.1 對照組和原發(fā)性高血壓組基線水平的比較
        5.5.2 ACE(I/D)基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性分析
        5.5.3 AGTR1(A1166C)基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性分析
    5.6 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血管緊張素Ⅱ1型受體基因A1166C多態(tài)性與不同民族原發(fā)性高血壓關(guān)系的相關(guān)性研究[J]. 李文霞,皇甫衛(wèi)忠,梁開堅(jiān),韋瑞富,吳祖茂,吳運(yùn)輝,葉華.  中華保健醫(yī)學(xué)雜志. 2019(06)
[2]原發(fā)性高血壓的基因機(jī)制-RAAS系統(tǒng)基因多態(tài)性[J]. 韓姍,叢洪良.  中國心血管雜志. 2007(02)
[3]血管緊張素Ⅱ1型受體A1166C多態(tài)性與高血壓左心室肥厚的相關(guān)性研究[J]. 李慶祥,朱曉玲,張宇清,李玉玲,顏紅兵,吳海英,劉國仗.  中國綜合臨床. 2006(01)
[4]血管緊張素Ⅱ1型受體基因單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性高血壓和冠心病的相關(guān)研究[J]. 張奎星,劉同寶,徐秋霞,朱鼎良,黃薇.  中華心血管病雜志. 2005(08)
[5]繼發(fā)性高血壓[J]. 佟萬仁,咸力明.  人民軍醫(yī). 2003(01)
[6]DMSO對PCR擴(kuò)增反應(yīng)的影響[J]. 徐葵,邱志明,汪曉英.  昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2001(01)

碩士論文
[1]生理—心理—倫理綜合診療模式對原發(fā)性高血壓患者的療效評價(jià)[D]. 許慧艷.鄭州大學(xué) 2019
[2]當(dāng)歸—川牛膝水煎劑及各組分對SHR血壓及ET-1、NO、VEGF和MMP-9的影響[D]. 王莉.甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 2019



本文編號：3643482