心臟發(fā)育過程十分復(fù)雜,人們在研究心臟病的發(fā)病機(jī)理過程中,對其中的一些難題已有了初步的解決方法和成效。但仍有許多問題亟待研究。通過鑒定心臟發(fā)育相關(guān)的調(diào)控因子,鑒定出與其相互作用的蛋白,發(fā)現(xiàn)其參與的信號通路,是研究基因功能的有效手段。闡明基因的分子調(diào)控機(jī)制將為研究清楚心臟發(fā)育的機(jī)制及心臟病的診斷等方面提供理論指導(dǎo)。本實驗室前期已克隆出人和斑馬魚TMP3基因的DNA全長,證明TMP3是一個膜蛋白,在心臟中高表達(dá),敲低斑馬魚TMP3基因?qū)е滦呐K畸形。同時證明TMP3與轉(zhuǎn)運蛋白TMPA4具有相互作用。通過分離膜、核、質(zhì)蛋白的CO-IP實驗,發(fā)現(xiàn)兩者在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核發(fā)生相互作用,提示TMP3蛋白入核,其入核過程可能需要轉(zhuǎn)運蛋白TMPA4的協(xié)助。生物信息學(xué)分析表明,TMP3基因免疫印記編碼的蛋白大小為35kd左右。我們通過免疫印記實驗表明,TMP3蛋白大小約57kd。我們猜測,TMP3作為膜蛋白可能通過某些修飾作用而增加蛋白質(zhì)的大小。我們?nèi)〕审w斑馬魚的心臟,分別提取細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核與細(xì)胞膜蛋白,檢測TMP3蛋白的表達(dá)分布情況。結(jié)果表明,在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中有35kd和57kd兩種大小的TMP3蛋白,細(xì)胞... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省211工程院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 引言
    1.1 斑馬魚簡介
    1.2 斑馬魚心臟發(fā)育過程
    1.3 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控脊椎動物心臟的早期發(fā)育
        1.3.1 NK-2同源異性因子
        1.3.2 鋅指蛋白GATA轉(zhuǎn)錄因子
        1.3.3 其它因子對心臟早期發(fā)育的調(diào)控
    1.4 TMP基因家族
    1.5 TMPA4簡介
    1.6 泛素化
    1.7 蛋白糖基化
    1.8 蛋白的SUMO化
    1.9 本文的研究意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料、試劑與設(shè)備
        2.1.1 酶類和試劑盒
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 其他試劑
        2.1.4 主要實驗儀器
        2.1.5 生物信息學(xué)分析的主要軟件與數(shù)據(jù)庫
    2.2 用到的生物學(xué)實驗方法
        2.2.1 組織樣品總RNA的提取步驟
        2.2.2 RNA甲醛變性膠電泳
        2.2.3 PCR反應(yīng)
        2.2.4 PCR產(chǎn)物的純化回收
        2.2.5 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.6 轉(zhuǎn)化(熱休克法)
        2.2.7 質(zhì)粒的小量制備
        2.2.8 陽性克隆的篩選與鑒定
        2.2.9 測序
        2.2.10 蛋白的提取
        2.2.11 核質(zhì)膜蛋白的提取
        2.2.12 酵母雙雜交(Two Hybrid System)
        2.2.13 免疫共沉淀(CO-IP)
        2.2.14 SDS-PAGE
        2.2.15 Western blot
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 TMP3基因在成體斑馬魚各組織中的表達(dá)檢測
    3.2 TMP3基因的亞細(xì)胞表達(dá)定位的分析
        3.2.1 TMP3和TMPA4相互作用的亞細(xì)胞定位分析
        3.2.2 TMP3在H9C2中的亞細(xì)胞表達(dá)
        3.2.3 TMP3在成體斑馬魚心臟細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位表達(dá)分析
    3.3 TMP3蛋白的糖基化檢測
    3.4 TMP3敲除斑馬魚在蛋白水平上的檢測
第四章 其它工作
    4.1 FOXP4抑制NKX2.5的表達(dá)
    4.2 FBXL5和FOXP4泛素化相關(guān)性的檢測
    4.3 多克隆抗體的制備
        4.3.1 基因克隆及載體構(gòu)建
        4.3.2 融合蛋白Nfatc3的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.3.3 Nfatc3融合蛋白表達(dá)純化
        4.3.4 Nfatc3多克隆抗體的制備
        4.3.5 Nfatc3多克隆抗體的檢測
        4.3.6 結(jié)果
第五章 結(jié)語與討論
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
后記


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小泛素相關(guān)修飾物SUMO研究進(jìn)展[J]. 陳泉,施蘊渝.  生命科學(xué). 2004(01)
[2]鋅指亞家族GATA-4、-5和-6的調(diào)控作用[J]. 肖婧,王躍群,吳秀山.  生命科學(xué)研究. 2003(S1)



本文編號：3641489