研究背景與目的:心肌纖維化（Myocardial fibrosis,MF）是當心肌受到各種外界損傷,例如機械壓力、炎癥刺激和局部缺血時,發(fā)生心肌適應性重塑的過程。MF最具特征的一個病理改變則是相關炎性細胞和活化的心肌成纖維細胞（Cardiac fibroblasts,CFs）積聚,繼而引起細胞外基質(zhì)（Extracellular matrix,ECM）的生成隨之劇增。不少證據(jù)表明,以心室收縮和舒張功能障礙為特征的心力衰竭（heart failure,HF）表現(xiàn)出嚴重MF。由于HF預后較差,對大多數(shù)心血管疾病患者的健康構(gòu)成極大威脅。因此,積極尋找MF有效的干預措施對延緩HF的疾病進程具有重大意義。MF的發(fā)展受多種因素的影響,其中氧化應激和炎癥反應均參與其中,炎癥因子,如TNF-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-6（interleukin-6,IL-6）和IL-1β等均與其發(fā)展密切相關。Lgr5是一種G蛋白偶聯(lián)受體,有研究發(fā)現(xiàn)R-spondin能夠與Lgr5結(jié)合,從而引起Wnt/β-Catenin信號轉(zhuǎn)導的激活。同時,有多個研究報道,Wnt/β-Cate... 

【文章來源】：成都醫(yī)學院四川省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
實驗材料
    主要實驗儀器
    主要實驗試劑
    配置的試劑
第一部分 ISO誘導小鼠心肌纖維化動物模型
    1 實驗方法
        1.1 小鼠心肌纖維化動物模型的制造
        1.2 小鼠體重、心率、血壓、心臟重量指數(shù)的檢測
        1.3 Masson染色觀察心肌纖維化程度
        1.4 RT-PCR檢測Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 mRNA的表達
        1.5 Western blotting檢測Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 蛋白的表達
        1.6 統(tǒng)計學處理
    2 實驗結(jié)果
        2.1 小鼠體重、心率、血壓、心臟重量指數(shù)
        2.2 Masson染色觀察小鼠心肌纖維化程度
        2.3 RT-PCR檢測CollagenI、CollagenⅢ及Lgr5 mRNA的表達
        2.4 Western blotting檢測Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 蛋白的表達
    3 討論
第二部分 特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對小鼠心肌纖維化的影響
    1 實驗方法
        1.1 敲基因小鼠構(gòu)建及基因型鑒定
        1.2 小鼠心肌纖維化動物模型的制造,具體造模方法參照同前(1.1)
        1.3 小鼠體重、心率、血壓、心臟重量指數(shù)的檢測,參照同前(1.2)
        1.4 小鼠心臟超聲檢查
        1.5 Masson及天狼星紅染色觀察Lgr5對心肌纖維化程度影響
        1.6 RT-PCR及 Western blotting檢測特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對collagen Ⅰ、collagen Ⅲ表達的影響
        1.7 HE染色觀察Lgr5對纖維化心肌中炎癥反應的影響
        1.8
        1.9 統(tǒng)計學處理
    2 實驗結(jié)果
        2.1 小鼠基因鑒定結(jié)果
        2.2 特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對小鼠體重、心率、血壓、心臟重量指數(shù)的影響
        2.3 超聲心動圖檢測特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對小鼠心功能的影響
        2.4 Masson及天狼星紅染色觀察特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對心肌纖維化程度的影響
        2.5 RT-PCR及 Western blotting檢測特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對collagen Ⅰ、collagen Ⅲ表達的影響
        2.6 HE染色觀察特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對纖維化心肌中炎癥反應的影響
        2.7 RT-PCR及 Western blotting檢測特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對MMP1、TIMP1、IL-6、TNF-α表達的影響
    3 討論
第三部分 特異性敲除心肌組織中的Lgr5在小鼠心肌纖維化中的作用制
    1 實驗方法
        1.1 小鼠心肌纖維化動物模型的制造(1.1)
        1.2 RT-PCR檢測Lgr5、wnt1、β-Catenin mRNA的表達基因引物見表 3-1
        1.3 Western blotting檢測Lgr5、wnt1、β-Catenin蛋白的表達
        1.4 統(tǒng)計方法
    2 實驗結(jié)果
        2.1 RT-PCR檢測Lgr5、wnt1、β-Catenin mRNA的表達
        2.2 Western blotting檢測Lgr5、wnt1、β-Catenin蛋白的表達
    3 討論
全文討論
全文結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
附錄
攻讀學位期間的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]《中國心血管病報告2018》概要[J]. 胡盛壽,高潤霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風,楊躍進,鄭哲,陳偉偉.  中國循環(huán)雜志. 2019(03)
[2]兩種心肌纖維化動物模型基本情況比較[J]. 徐為民,孫志,陳歡,時景偉.  中國實驗診斷學. 2018(04)
[3]氧化應激致心室重構(gòu)的研究進展[J]. 朱凱媛,蔡輝.  安徽醫(yī)藥. 2015(09)

碩士論文
[1]利用CRISPR/Cas9技術構(gòu)建Hoxc13基因敲除兔模型[D]. 鄧吉超.吉林大學 2018



本文編號：3633197