研究背景與目的:心肌纖維化（Myocardial fibrosis,MF）是當(dāng)心肌受到各種外界損傷,例如機(jī)械壓力、炎癥刺激和局部缺血時,發(fā)生心肌適應(yīng)性重塑的過程。MF最具特征的一個病理改變則是相關(guān)炎性細(xì)胞和活化的心肌成纖維細(xì)胞（Cardiac fibroblasts,CFs）積聚,繼而引起細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix,ECM）的生成隨之劇增。不少證據(jù)表明,以心室收縮和舒張功能障礙為特征的心力衰竭（heart failure,HF）表現(xiàn)出嚴(yán)重MF。由于HF預(yù)后較差,對大多數(shù)心血管疾病患者的健康構(gòu)成極大威脅。因此,積極尋找MF有效的干預(yù)措施對延緩HF的疾病進(jìn)程具有重大意義。MF的發(fā)展受多種因素的影響,其中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)均參與其中,炎癥因子,如TNF-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-6（interleukin-6,IL-6）和IL-1β等均與其發(fā)展密切相關(guān)。Lgr5是一種G蛋白偶聯(lián)受體,有研究發(fā)現(xiàn)R-spondin能夠與Lgr5結(jié)合,從而引起Wnt/β-Catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的激活。同時,有多個研究報(bào)道,Wnt/β-Cate... 

【文章來源】：成都醫(yī)學(xué)院四川省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
實(shí)驗(yàn)材料
    主要實(shí)驗(yàn)儀器
    主要實(shí)驗(yàn)試劑
    配置的試劑
第一部分 ISO誘導(dǎo)小鼠心肌纖維化動物模型
    1 實(shí)驗(yàn)方法
        1.1 小鼠心肌纖維化動物模型的制造
        1.2 小鼠體重、心率、血壓、心臟重量指數(shù)的檢測
        1.3 Masson染色觀察心肌纖維化程度
        1.4 RT-PCR檢測Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 mRNA的表達(dá)
        1.5 Western blotting檢測Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 蛋白的表達(dá)
        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 小鼠體重、心率、血壓、心臟重量指數(shù)
        2.2 Masson染色觀察小鼠心肌纖維化程度
        2.3 RT-PCR檢測CollagenI、CollagenⅢ及Lgr5 mRNA的表達(dá)
        2.4 Western blotting檢測Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 蛋白的表達(dá)
    3 討論
第二部分 特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對小鼠心肌纖維化的影響
    1 實(shí)驗(yàn)方法
        1.1 敲基因小鼠構(gòu)建及基因型鑒定
        1.2 小鼠心肌纖維化動物模型的制造,具體造模方法參照同前(1.1)
        1.3 小鼠體重、心率、血壓、心臟重量指數(shù)的檢測,參照同前(1.2)
        1.4 小鼠心臟超聲檢查
        1.5 Masson及天狼星紅染色觀察Lgr5對心肌纖維化程度影響
        1.6 RT-PCR及 Western blotting檢測特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對collagen Ⅰ、collagen Ⅲ表達(dá)的影響
        1.7 HE染色觀察Lgr5對纖維化心肌中炎癥反應(yīng)的影響
        1.8
        1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 小鼠基因鑒定結(jié)果
        2.2 特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對小鼠體重、心率、血壓、心臟重量指數(shù)的影響
        2.3 超聲心動圖檢測特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對小鼠心功能的影響
        2.4 Masson及天狼星紅染色觀察特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對心肌纖維化程度的影響
        2.5 RT-PCR及 Western blotting檢測特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對collagen Ⅰ、collagen Ⅲ表達(dá)的影響
        2.6 HE染色觀察特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對纖維化心肌中炎癥反應(yīng)的影響
        2.7 RT-PCR及 Western blotting檢測特異性敲除心肌組織中的Lgr5 對MMP1、TIMP1、IL-6、TNF-α表達(dá)的影響
    3 討論
第三部分 特異性敲除心肌組織中的Lgr5在小鼠心肌纖維化中的作用制
    1 實(shí)驗(yàn)方法
        1.1 小鼠心肌纖維化動物模型的制造(1.1)
        1.2 RT-PCR檢測Lgr5、wnt1、β-Catenin mRNA的表達(dá)基因引物見表 3-1
        1.3 Western blotting檢測Lgr5、wnt1、β-Catenin蛋白的表達(dá)
        1.4 統(tǒng)計(jì)方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 RT-PCR檢測Lgr5、wnt1、β-Catenin mRNA的表達(dá)
        2.2 Western blotting檢測Lgr5、wnt1、β-Catenin蛋白的表達(dá)
    3 討論
全文討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]《中國心血管病報(bào)告2018》概要[J]. 胡盛壽,高潤霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風(fēng),楊躍進(jìn),鄭哲,陳偉偉.  中國循環(huán)雜志. 2019(03)
[2]兩種心肌纖維化動物模型基本情況比較[J]. 徐為民,孫志,陳歡,時景偉.  中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué). 2018(04)
[3]氧化應(yīng)激致心室重構(gòu)的研究進(jìn)展[J]. 朱凱媛,蔡輝.  安徽醫(yī)藥. 2015(09)

碩士論文
[1]利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Hoxc13基因敲除兔模型[D]. 鄧吉超.吉林大學(xué) 2018



本文編號：3633197