發(fā)布時間：2022-02-13 22:49

　　第一部分人CILP2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定目的：構(gòu)建人pIRES2-EGFP-CILP2-Flag質(zhì)粒方法：提取HEK293細(xì)胞mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成模板DNA,高保真酶PCR獲取CILP2-Flag基因片段，經(jīng)BglII和EcoRI雙酶切，連接重組至pIRES2-EGFP空載質(zhì)粒上。雙酶切和基因測序鑒定質(zhì)粒構(gòu)建效果。結(jié)果：BglII和EcoRI雙酶切重組質(zhì)粒，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，在約3.5kb和5.3kb處出現(xiàn)條帶，初步鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。測序結(jié)果經(jīng)NCBI blast對比分析，核酸序列與GenBank中CILP2CDS區(qū)序列同源性完全一致，且C端正確帶上Flag片段。結(jié)論：成功構(gòu)建pIRES2-EGFP-CILP2-Flag標(biāo)簽質(zhì)粒，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。第二部分cilp2基因在小鼠體內(nèi)表達(dá)分布和不同病理模型中的表達(dá)差異目的：檢測cilp2基因在正常C57BL/6J小鼠體內(nèi)的mRNA表達(dá)分布，以及在ApoE-/-小鼠和冠心病人中的mRNA和蛋白表達(dá)差異。方法：取普食喂養(yǎng)C57BL/6J12周齡雄性小鼠3只脫頸處死，留取心，肝，脾，胃，肌肉，腦，腎，肺組織，提取mRNA,... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pIRES2-EGFP質(zhì)粒載體信息Fig1.1pIRES2-EGFPplasmidinformation

圖 1.2 重組質(zhì)粒酶切鑒定nzyme digestion of pIRES2-EGFP-CIRES2-EGFP-CILP2-Flag+BglII+Eco2-EGFP-CILP2-Flag 測序鑒 測序，結(jié)果顯示插入序列與 Ge完全一致，并且插入方向正確（

圖 1.2 重組質(zhì)粒酶切鑒定Fig1.2 Enzyme digestion of pIRES2-EGFP-CILP2-FlagpIRES2-EGFP-CILP2-Flag+BglII+EcoRⅠ2.2 重組質(zhì)粒 pIRES2-EGFP-CILP2-Flag 測序鑒定2.2.1 測序結(jié)果雙向法對質(zhì)粒 DNA 測序，結(jié)果顯示插入序列與 Genbank 數(shù)據(jù)庫中檢索到的CILP2 基因 CDS 區(qū)序列完全一致，并且插入方向正確（圖 1.3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]YKL-40在骨關(guān)節(jié)炎中的研究進(jìn)展[J]. 鐘文婕,柳占彪.  醫(yī)學(xué)綜述. 2013(03)
[2]Implications of discoveries from genome-wide association studies in current cardiovascular practice[J]. Panniyammakal Jeemon,Kerry Pettigrew,Christopher Sainsbury,Dorairaj Prabhakaran,Sandosh Padmanabhan.  World Journal of Cardiology. 2011(07)
[3]瘦素對體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞分泌NO和MMP-13的影響[J]. 羅遠(yuǎn)明,肖濤,胡金璽,曾偉,胡何佳,楊湘丞.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2009(10)
[4]Lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1:protein,ligands,expression and pathophvsiological significance[J]. CHEN Xiu-ping DU Guan-hua Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China.  Chinese Medical Journal. 2007(05)



本文編號：3624060