目的:心房顫動（Atrial fibrillation,AF）是一種“老年病”,其發(fā)病率隨著年齡的增長而增加。纖維化是多種心血管疾病的共同病理過程,包括心房顫動,而衰老可參與纖維化的發(fā)生。既往研究顯示輔轉(zhuǎn)錄激活因子p300在衰老和纖維化的病理過程中均起重要作用,因此本課題擬驗證p300/p53/Smad3通路是否參與心房成纖維細胞衰老,進而導致心房衰老相關(guān)的心房纖維化,最終在AF的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。探討衰老在房顫病理發(fā)生過程中的潛在機制,為臨床房顫的防治提供新的靶點及實驗依據(jù)。方法:（1）收集不同年齡組（年輕組:18-49歲;年老組:≥50歲）的AF和竇性心律（Sinus rhythm,SR）患者的心房組織,運用Masson三原色染色和Western Blot實驗方法檢測各組的心房組織纖維化程度,p300和衰老相關(guān)信號通路p53/p21的蛋白表達,纖維化相關(guān)指標和信號通路III型和I型膠原蛋白（COL3A1/COL1A1）、基質(zhì)金屬蛋白酶2/9（MMP-2/9）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）和Smad3/p-Smad3蛋白水平的表達變化。（2）建立自然衰老小鼠動物模型,Mass... 

【文章來源】：華南理工大學廣東省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

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不同年齡SR/AF患者p300和衰老及纖維化相關(guān)信號通路蛋白表達水平Figure2-1Theproteinexpressionlevelsofp300/p53/Smad3inSR/AFpatientswithdifferentages.注：圖示為SRyoung（18-49歲）、SRold（≥50歲）、AFyoung（18-49歲）、AFold（≥50歲）人心房組織p300，p53/p21，Smad3/p-Smad3蛋白表達水平的不同

第二章不同年齡SR/AF患者心房組織p300與衰老和纖維化相關(guān)19圖2-2不同年齡SR/AF患者心房組織纖維化程度檢測Figure2-2TheMassonstainingandtheexpressionleveloffibrosisassociatedproteinsinatrialtissuesofSR/AFpatientswithdifferentages.注：圖示為SRyoung（18-49歲）、SRold（≥50歲）、AFyoung（18-49歲）、AFold（≥50歲）人心房組織纖維化相關(guān)蛋白表達水平的不同。以GAPDH為內(nèi)參的定量統(tǒng)計結(jié)果，均數(shù)±標準誤，n=7-8，*P<0.05vs.SRyoung，**P<0.01vs.SRyoung，#P<0.05vs.SRold，&P<0.05vs.AFyoung。

第三章自然衰老小鼠模型中p300與衰老和纖維化相關(guān)29recoverytime,SNRT）、小鼠右房不同刺激基礎周長下的有效不應期（atrialmuscleeffectiverefractoryperiod,AERP）、房顫誘發(fā)率等指標，比較各組小鼠電生理參數(shù)差異。具體實驗方法如下：（1）麻醉固定及體表心電圖：按照上述3.3.5、3.3.6中實驗方法操作。（2）頸內(nèi)靜脈置管：頸部備皮、消毒，做正中切口，鈍性逐層分離出一側(cè)頸內(nèi)靜脈，操作過程中實時監(jiān)測小鼠呼吸心跳等生命體征、體表及腔內(nèi)心電圖，分離出的頸內(nèi)靜脈段，眼科剪剪一小口，逐步送入1.2F電極導管（4個環(huán)狀電極，電極寬1mm，間距2mm）至右心房，結(jié)合腔內(nèi)心電圖顯示大A波、小V波位確認心房位置后，固定電極導管，再逐步進行后續(xù)刺激實驗。（3）SNRT：采用連續(xù)單刺激模式，設置刺激參數(shù)：基礎周長為100ms、2倍有效心房奪獲的起搏電壓閾值為刺激幅度、脈寬1ms，連續(xù)起搏30ms。測量最后一次刺激和起搏結(jié)束后第一個小鼠自發(fā)心房除極恢復的時間即為SNRT。（4）AERP：采用程序刺激（S1S2刺激）模式，采用2倍有效心房奪獲的起搏電壓閾值為刺激幅度，脈寬2ms，在8個S1S1刺激的基礎上加施一個S2期前刺激，S2以-2ms步長掃描�；A周長分別選擇100ms、80ms和60ms，S2自70ms或60ms遞減2ms直至心房不應。AERP定義為未能成功奪獲心房的S1-S2間期最長者。（5）房顫誘發(fā)：采用Burst刺激方式起搏刺激心房，刺激周長設為20ms，脈寬1ms，輸出電壓6V，起搏刺激持續(xù)時間15s，重復10次。AF定義為心房無序的電活動，當體表心電圖P波消失，代之以大小不一、形態(tài)不一、間隔不等的的f波，持續(xù)1s以上則被認為AF誘發(fā)成功。圖3-1小鼠體表心電及經(jīng)頸靜脈在體心房起搏實驗Figure3-1TheECGandtransvenouselectrophysiologicalstudyinC57BL/6mice3.4.8統(tǒng)計方法

【參考文獻】：
期刊論文
[1]衰老與心肌纖維化[J]. 高小燕,鄧春玉,饒芳.  醫(yī)學綜述. 2018(24)
[2]CREB-binding protein, p300, butyrate, and Wnt signaling in colorectal cancer[J]. Michael Bordonaro,Darina L Lazarova.  World Journal of Gastroenterology. 2015(27)



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