目的分離、培養(yǎng)敘利亞金黃地鼠的血管平滑肌細胞,并對其進行鑒定及生長觀察。方法取3～4周齡雄性敘利亞金黃地鼠2只,處死后取主動脈,采用組織塊貼壁法對血管平滑肌細胞進行分離、原代和傳代培養(yǎng)。采用倒置相差顯微鏡對原代培養(yǎng)3 d后的細胞及前3代傳代細胞進行形態(tài)學觀察。取第3代對數(shù)生長期的血管平滑肌細胞,采用細胞免疫熒光技術觀察平滑肌細胞特異性標志因子平滑肌肌動蛋白α（α-SMA）、平滑肌22α（SM22α）染色情況,采用CCK-8法檢測細胞培養(yǎng)1～7 d的增殖能力（OD值）。結果原代培養(yǎng)3～5 d,有少量血管平滑肌細胞從組織中爬出,呈貼壁生長;原代培養(yǎng)7～9 d,細胞呈梭形或三角形,生命力旺盛,折光度好;原代培養(yǎng)9 d后,細胞增殖能力明顯增強,細胞數(shù)量增多,細胞與細胞間排列緊密,出現(xiàn)"峰-谷"狀特征;原代培養(yǎng)15 d左右可以進行傳代培養(yǎng)。前3代傳代細胞與原代細胞相比,形態(tài)無明顯變化。細胞免疫熒光結果顯示,α-SMA、SM22α將細胞質染成綠色,血管平滑肌細胞純度> 95%。血管平滑肌細胞培養(yǎng)1～7 d的OD值分別為0.437 3±0.021 5、0.460 0±0.018 8、0.614... 

【文章來源】：山東醫(yī)藥. 2020,60(23)

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【部分圖文】：

敘利亞金黃地鼠血管平滑肌細胞α-SMA、SM22α細胞免疫熒光鑒定結果(200×)

大鼠和小鼠由于成本低、易飼養(yǎng)，之前多被研究者作為動脈粥樣硬化的首選動物模型。但是隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)大鼠糖脂代謝機制與人類相差較大[5]，而小鼠存在一次性采血量少且不能連續(xù)采血的缺點[6]。敘利亞金黃地鼠屬于嚙齒類動物，體型介于大鼠和小鼠之間，在1930年從中東敘利亞引進[7]。研究表明，與大鼠、小鼠比較，敘利亞金黃地鼠血漿脂蛋白譜、肝臟合成膽固醇速率以及膳食膽固醇需要量和代謝率與人類更為相似[8～11]。因此，將敘利亞金黃地鼠作為高血脂、動脈粥樣硬化、糖尿病等以糖脂代謝紊亂為特征的心血管病動物模型已成為一種趨勢。為了深入研究上述心血管疾病的發(fā)病機制，體外培養(yǎng)穩(wěn)定的敘利亞金黃地鼠血管平滑肌細胞模型也逐漸成為研究熱點。既往小鼠血管平滑肌細胞原代培養(yǎng)常采用酶消化法[12～14]，該方法價格昂貴且消化時間和配比濃度不好把控，有可能導致細胞獲得量少、活性差等。因此，本研究選擇組織塊貼壁法[15]提取敘利亞金黃地鼠主動脈血管平滑肌細胞。在原代細胞的提取過程中，需將心血管外膜剝離干凈，刮去內膜，以避免內皮細胞和成纖維細胞的污染，確保原代血管平滑肌細胞的純度。本研究結果顯示，分離提取的血管平滑肌細胞經(jīng)過細胞形態(tài)學觀察及細胞免疫熒光鑒定，血管平滑肌細胞純度>95%;傳代的血管平滑肌細胞培養(yǎng)1 d時處于增殖潛伏期，細胞增長緩慢;2～4 d處于對數(shù)生長期，增殖能力最強;5～7 d處于平臺期，細胞出現(xiàn)生長抑制的現(xiàn)象，增殖能力開始降低。因此，本研究提取的血管平滑肌細胞傳代后2～4 d是進行后續(xù)實驗的最佳時期。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]大鼠結腸平滑肌細胞原代培養(yǎng)方法簡化研究[J]. 劉啟艷,彭玉,詹偉,冷麗.  武漢大學學報(醫(yī)學版). 2020(01)
[2]Ⅰ型膠原與異丙腎上腺素調控三維培養(yǎng)膠上大鼠氣道平滑肌細胞的分枝結構形成[J]. 錢智莉,鄧林紅,歐陽明星.  生物醫(yī)學工程研究. 2019(03)
[3]低氧處理增強體外培養(yǎng)小鼠肺動脈平滑肌細胞的增殖和遷移能力[J]. 沈慧,張麗娜,姚德山,張振剛,龔開政.  細胞與分子免疫學雜志. 2019(01)

碩士論文
[1]新型金黃地鼠頸動脈粥樣硬化模型的建立及影像學基礎研究[D]. 劉輝.中南大學 2012



本文編號：3597098