背景與目的:肥厚型心肌�。℉ypertrophic cardiomyopathy,HCM）是一種由編碼肌節(jié)蛋白基因突變引起的常染色體顯性遺傳性疾病,其臨床特征是左心室不對(duì)稱性肥厚和舒張功能障礙。HCM臨床表現(xiàn)廣泛,從無癥狀到輕微臨床癥狀、心力衰竭,甚至心源性猝死（Sudden cardiac death,SCD）,大部分患者通常具有較晚的發(fā)病年齡、溫和的臨床病程和較低的SCD發(fā)生率（每年0.5-1%）。然而,我們?cè)?個(gè)HCM家族中發(fā)現(xiàn)其家系成員具有高度外顯、嚴(yán)重心肌肥厚及猝死高發(fā)的臨床表型。了解該致病突變與臨床表型之間的聯(lián)系具有重要的臨床意義。資料與方法:本研究入選2018年12月就診于陸軍軍醫(yī)大學(xué)附屬新橋醫(yī)院的HCM家系1例,共9人（3人死亡,6人在世）,所有研究對(duì)象均簽署知情同意書,了解本研究的目的和風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)家系成員進(jìn)行臨床調(diào)查,調(diào)查數(shù)據(jù)包括臨床癥狀和體征、常規(guī)心電圖、動(dòng)態(tài)心電圖、超聲心動(dòng)圖和3.0T心臟磁共振（Cardiac magnetic resonance,CMR）,并定期隨訪1年。同時(shí),采集在世家系成員靜脈血,該家族先證者及其父母和侄女接受全外顯子組測(cè)序（Whole-ex... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

家系遺傳圖譜

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文18（GERP,phyloP20way,phastCons20way），剪接預(yù)測(cè)有害（MaxEntScan,splice_dbscSNV）預(yù)測(cè)出變異對(duì)基因(基因產(chǎn)物)有影響符合可能致病證據(jù)PP3。這些發(fā)現(xiàn)提供了強(qiáng)有力的遺傳證據(jù)，證明鑒定的MYBPC3基因c.2737+1(IVS26)G>T變體是該家族中的致病變體，并考慮其為該家族致病的因果突變。不幸的是，通過一代測(cè)序驗(yàn)證，先證者兩個(gè)年幼的兒子（III-8，III-9）也被確認(rèn)攜帶該致病雜合突變，測(cè)序峰圖見圖3。表4全外顯子組測(cè)序檢測(cè)的變體基因染色體位置核酸改變(外顯子號(hào))氨基酸改變先證者(患者)父親(患者)母親(正常)侄女(患者)相關(guān)疾病(OMIM號(hào)),遺傳方式MYBPC3chr11:47,357,427c.2737+1(IVS26)G>T—雜合雜合野生型雜合CMH4(OMIM:115197),ADACTN2chr1:236,849,999c.26(exon1)A>Gp.Gln9Arg雜合雜合野生型野生型CMD1AA(OMIM:612158),ADPSEN2chr1:227,076,603c.640(exon8)G>Tp.Val214Leu雜合野生型雜合雜合CMD1V(OMIM:613697),AD注：CMH4：家族性肥厚型心肌病4型；CMD1AA：擴(kuò)張型心肌病1AA型;CMD1V：擴(kuò)張型心肌病1V型;AD：常染色體顯性遺傳；圖3MYBPC3基因c.2737+1(IVS26)G>T突變Sanger測(cè)序圖注：NCBI參考序列（A）；突變序列（B）；箭頭所指位置為突變位點(diǎn)

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文193.4cDNA測(cè)序（逆轉(zhuǎn)錄測(cè)序）驗(yàn)證數(shù)據(jù)來自先證者靜脈血的擴(kuò)增子的核苷酸測(cè)序證實(shí)，在突變等位基因的剪接過程中外顯子26號(hào)被跳過（圖4）。外顯子26含有來自c.2603-c.2737的135個(gè)堿基，因?yàn)槿笔У膲A基為3的整數(shù)倍，其不會(huì)引起移碼和引入新的序列。圖4剪接位點(diǎn)的cDNA測(cè)序（反轉(zhuǎn)錄測(cè)序）驗(yàn)證測(cè)序圖注：NCBI參考序列（A）；突變的mRNA序列（B）；3.5突變蛋白的結(jié)構(gòu)損害預(yù)測(cè)結(jié)果我們比較了NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)c.2602/c.2603/c.2604編碼甘氨酸（p.868），c.2737/c.2738/c.2739編碼半胱氨酸（p.912）。c.2603-c.2737跳過后，c.2602/c.2738/c.2739形成編碼甘氨酸的密碼子GGC，因此缺失的氨基酸數(shù)為45個(gè)（p.869-p.912）（圖5A）。使用I-TASSER服務(wù)器（ZhangY2008）通過同源建模建立cMyBP-C（殘基867至964）中C7結(jié)構(gòu)域的3D結(jié)構(gòu)整體。C-得分=0.90（表示建模置信度的值，通常在-5到2的范圍內(nèi)，值越高，置信度越高）的模型顯示出與人類MYBPC1蛋白（PDB2YUX）類似的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和典型的β折疊桶狀結(jié)構(gòu)（圖5B），在本研究中發(fā)現(xiàn)的突變將導(dǎo)致殘基869-912的肽鏈（圖5中紅色框和紅色條帶所示）缺失，其包含3條β鏈（β1至β3）。顯然，缺少這些β鏈肯定會(huì)阻止其在結(jié)構(gòu)的核心處形成β折疊桶狀結(jié)構(gòu)，并導(dǎo)致整體結(jié)構(gòu)的崩塌。從結(jié)構(gòu)的角度來看，C7結(jié)構(gòu)域正確折疊的嚴(yán)重破壞會(huì)在cMyBP-C的整體結(jié)構(gòu)中產(chǎn)生級(jí)聯(lián)效應(yīng)，包括隨后結(jié)構(gòu)域（C8–Cx）的方向和位置變化，這將進(jìn)一步干擾cMyBP-C插入肌節(jié)A帶并導(dǎo)致明顯功能喪失。


本文編號(hào)：3584422