[研究背景和目的]先天性心臟�。╟ongenital heart disease,CHD）是人類最常見的出生缺陷疾病,是導(dǎo)致嬰幼兒非感染性疾病中最主要的死亡原因。法洛四聯(lián)癥（Tetralogy of Fallot,TOF）是最常見的復(fù)雜性、紫紺性CHD,其死亡率較高,在10歲內(nèi),未經(jīng)治療的患者死亡率高達(dá)70-75%,但是由于目前缺乏相應(yīng)的疾病模型,TOF的基因?qū)W、細(xì)胞學(xué)及分子學(xué)病因仍未明確。因此,我們需要一種新的工具或疾病模型系統(tǒng)來對(duì)TOF進(jìn)行研究,使我們更好的探索其發(fā)生及發(fā)展過程中的病理生理學(xué)機(jī)制。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）是利用重編程技術(shù)向體細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入重編程因子得到的一種具有與胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell,ESCs）相似的全能性的細(xì)胞,基于其明確的基因背景等特點(diǎn),iPSCs為發(fā)育生物學(xué)及遺傳疾病的病因生物學(xué)的研究提供了一種全新的思路。在心血管疾病的研究中,由于其能較好的保留樣本的遺傳背景,同時(shí)能很好的模擬心臟的發(fā)育過程,iPSCs為探索遺傳變異導(dǎo)致的心臟發(fā)育異常提供了一個(gè)獨(dú)特的細(xì)胞平臺(tái)。基于以上理... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：163 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２皮膚成纖維細(xì)胞的組織塊貼壁培養(yǎng)（Ａ）組織塊貼壁培養(yǎng)約７天后可見梭型細(xì)胞從組織??塊邊緣逐漸爬出；（Ｂ）培養(yǎng)約兩周后組織塊周圍貼壁的梭型細(xì)胞明顯增多；（Ｃ）細(xì)胞第一??次傳代培養(yǎng)后細(xì)胞融合度達(dá)到５０－６０％；?（Ｄ）細(xì)胞生長融合度到達(dá)８０－９０％

維細(xì)胞傳代接種第１？２天細(xì)胞處于潛伏期，增殖相對(duì)不明顯，第３？５天進(jìn)入對(duì)數(shù)??增殖期，細(xì)胞增殖加速；第５－７天進(jìn)入平臺(tái)期，三株細(xì)胞增殖能力基本相似，生??長曲線相似，均呈現(xiàn)為“Ｓ”型，證實(shí)５株細(xì)胞均具有較好的增殖能力（如圖４）。??－ｍ－?ＨＦＦ－１??２〇?＋?ＨＦＦ－２??ＴＯＦ－１??１．５－?＋?ＴＯＦ－２??〇?＋?ＴＯＦ－３??Ｉ－?ｙ??。５??０．０－１?１?１?ｉ?１??０?２?４?６?８??Ｄａｙ??圖４人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖曲線使用ＣＣＫ８法對(duì)５株原代培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞生長曲線進(jìn)??行檢測(cè)，５株細(xì)胞均具有較好的增殖能力。??Ｆｉｇｕｒｅ．４?Ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅｓ?ｏｆ?ｈｕｍａｎ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ．?Ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅｓ?ｏｆ?ｆｉｖｅ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ?ｗｅｒｅ??ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＣＣＫ８?ｍｅｔｈｏｄ，?ａｌｌ?ｔｈｅ?ｆｉｖｅ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ?ｈａｄ?ｇｏｏｄ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｙ．??３．誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的建立及鑒定??３．１皮膚成纖維細(xì)胞的重編程??在成纖維細(xì)胞融合度到達(dá)約８０％后，進(jìn)行成纖維細(xì)胞的重編程。在病毒感染??后第５天，顯微鏡下觀察皮膚成纖維細(xì)胞可見細(xì)胞形態(tài)總體仍然呈現(xiàn)為梭形或不??規(guī)則的三角形，有部分細(xì)胞逐漸變圓，部分細(xì)胞發(fā)生聚集現(xiàn)象（圖５Ａ）；繼續(xù)進(jìn)??行換液培養(yǎng)，在病毒轉(zhuǎn)染后約第１０天，顯微鏡下可見重編程的細(xì)胞己經(jīng)明顯聚??集成小克隆狀的卵圓形（圖５Ｂ）；在細(xì)胞轉(zhuǎn)染后約３０天，可在顯微鏡下觀察到??細(xì)胞克隆逐漸出現(xiàn)，克隆呈現(xiàn)為不規(guī)則圓形的突起，中心部位細(xì)胞聚集較密集，??而邊

ａ?ｆｌＨＨＨＩｌＨ?Ｂ?ｆｌＨＨＨＨＩ??２５０｜＾ｒｉ?２５０＾ｍ??Ｄａｙ?５?（?４０Ｘ?）?Ｄａｙ?１０?（?４０Ｘ?）??Ｃ?Ｄ??ＷＭ－＇－ｃ－：?－?■?ｒ＇－＇－＇??士．?．．??Ｄａｙ?３０?（?４０Ｘ?）?Ｄａｙ?６０?（?４０Ｘ?）??圖５人皮膚成纖維細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的過程（Ａ）成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染后第５天，??可見少量細(xì)胞開始聚集；（Ｂ）成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染后第１０天，可見細(xì)胞聚集為卵圓形；（Ｃ）成??纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染后第３０天，可見細(xì)胞克隆形成；（Ｄ）成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染后第６０天，類ＥＳＣｓ??樣細(xì)胞挑選并傳代培養(yǎng)后，呈現(xiàn)為克隆樣生長。??Ｆｉｇｕｒｅ．５?Ｈｕｍａｎ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ?ｗｅｒｅ?ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ?ｉｎｔｏ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ．?（Ａ）?Ｏｎ??ｄａｙ?５?ａｆｔｅｒ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，?ａ?ｓｍａｌｌ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｃｅｌｌｓ?ｂｅｇａｎ?ｔｏ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｅ．?（Ｂ）?Ｏｎ?ｄａｙ?１０?ａｆｔｅｒ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｂｅｇａｎ?ｔｏ?ｆｏｒｍ?ｂｌｏｃｋ?ｍａｓｓ．?（Ｃ）?３０?ｄａｙｓ?ａｆｔｅｒ?ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，??Ｃｅｌｌｓ?ｃｌｏｎｅｓ?ｗｅｒｅ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ．?（Ｄ）?Ｏｎ?ｄａｙ?６０?ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，?ｔｈｅ?ＥＳＣ－ｌｉｋｅ?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｓｅｌｅｃｔｅｄ??ａｎｄ?ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ?ａｎｄ?ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｃｌｏｎｅ?ｇｒｏｗｔｈ．?


本文編號(hào)：3583970