目的:探討羥基脲誘導(dǎo)K562細(xì)胞γ-珠蛋白表達(dá)過程中P38MAPK信號的調(diào)控作用及機制,為明確羥基脲誘導(dǎo)γ-珠蛋白表達(dá)的作用機制提供新的實驗依據(jù)。方法:將終濃度設(shè)為0μM、100μM、200μM、300μM、400μM的羥基脲分別作用于K562細(xì)胞,選取4個不同觀察時間點（24h、48h、72h、96h）進(jìn)行檢查。RT-PCR檢測不同濃度羥基脲作用不同時間后K562細(xì)胞γ-珠蛋白基因mRNA表達(dá)水平;CCK-8試劑盒檢測不同濃度羥基脲作用不同時間后K562細(xì)胞存活率;流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度羥基脲作用后K562細(xì)胞凋亡率,篩選出羥基脲最佳作用濃度和時間,并以該條件評估羥基脲作用后BCL11A等相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的差異性。隨后設(shè)立羥基脲實驗組、羥基脲+SB203580實驗組、等體積SB203580抑制劑組和PBS陰性對照組,采用RT-PCR進(jìn)一步檢測γ-珠蛋白基因、P38MAPK以及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因mRNA表達(dá)水平,western blot檢測γ-珠蛋白、P38MAPK總蛋白和磷酸化蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1、篩選羥基脲最佳作用濃度和時間,結(jié)果顯示不同濃度、時間作用下K562細(xì)胞γ-珠蛋白基因m... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度羥基脲誘導(dǎo)K562細(xì)胞24h、48h、72h、96h，γ-珠蛋白基因mRNA表達(dá)的濃度與時間交互作用圖

互作用（F=11.779，P=0.001）。隨著藥物濃度的增K562 細(xì)胞存活率逐漸下降，其中相同濃度不同時間具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）；相同時間不同濃度之有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000），見表 3-2 和圖 3-2。表 3-2 不同濃度羥基脲作用不同時間K562 細(xì)胞存活率情況（ X±S，n=3 ）24h 48h 72h 96h.891±0.031* 0.864±0.016* 0.847±0.027* 0.619±0.845±0.025* 0.710±0.023* 0.620±0.016* 0.456±0.790±0.055* 0.643±0.015* 0.481±0.018* 0.360±0.720±0.037* 0.594±0.010* 0.421±0.020* 0.295±0時間之間兩兩比較，*P<0.001；相同時間不同濃度之間兩兩比較，

統(tǒng)計學(xué)意義（F=3.802,P=0.039，F(xiàn)=6.298,P=0.043，F(xiàn)=7.709,P=0.004）。羥基脲作用7h后，K562細(xì)胞凋亡率存在濃度依賴性，濃度越大，細(xì)胞凋亡率越大，見表3-3和圖3-3。表3-3 不同濃度羥基脲作用K562細(xì)胞72h后細(xì)胞凋亡率比較（X±S，n=3）濃度（μM） Q3(早期凋亡,%) Q2(晚期凋亡,%) Q3+ Q2(總凋亡，%)0 3.58±0.95 0.22±0.33 3.81±0.92100200300400F 值P 值4.53±1.74 0.33±0.74 4.86±1.665.27±1.63 0.48±0.10 5.75±1.536.69±1.72 0.89±0.41 7.58±1.397.96±1.55 1.32±0.68 9.28±1.183.802 6.298 7.7090.039 0.043 0.004A B CD E圖 3-3 不同濃度羥基脲作用 K562 細(xì)胞 72h，細(xì)胞凋亡率情況 A:0μM B：100μM C：200μMD：300μM E：400μMFigure3-3 The apoptosis rate in K562 cells with different concentrations hydroxyurea in

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號：3559508