目的：有關(guān)心血管疾病的基礎(chǔ)研究中,證實(shí)閏盤(pán)相關(guān)基因Z0-1在心肌不同病理情況下有不同的改變,并與已明確同心肌電生理相關(guān)的Cx43分子存在相互作用。本實(shí)驗(yàn)欲構(gòu)建豬Z0-1基因的重組慢病毒表達(dá)載體,用其病毒液感染豬iPS細(xì)胞,以獲得攜帶該目的基因的豬iPS細(xì)胞。方法：分析Genbank的豬Z0-1mRNA序列,設(shè)計(jì)分別含有BamHI、SalI酶切位點(diǎn)的Z0-1基因上下游引物,PCR擴(kuò)增該基因,將其連接入載體,構(gòu)建Lenti-EF1α-EGFP-TRE-Z01重組慢病毒表達(dá)載體,挑選正確的克隆進(jìn)行測(cè)序鑒定。在此基礎(chǔ)上,使用慢病毒包裝質(zhì)粒pVSVG、質(zhì)粒delta8.91和Fugene轉(zhuǎn)染試劑一同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,獲得病毒液,檢測(cè)病毒滴度,感染豬iPS細(xì)胞。結(jié)果：成功構(gòu)建了含有豬Z0-1基因的重組表達(dá)載體,通過(guò)酶切鑒定及測(cè)序鑒定證明結(jié)果與所設(shè)計(jì)序列相同。并成功包裝出慢病毒,獲得滴度為1.42*108IU/ml的病毒液,成功感染豬iPS細(xì)胞。結(jié)論：本課題成功構(gòu)建慢病毒載體Lenti-EF1α-EGFP-TRE-Z01,及滴度為1.42*108IU/ml的病毒液感染豬iPS細(xì)胞,為研究Z0-1的基... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Z01DAPI染色結(jié)果

3-5、3-6分別為L(zhǎng)enti-EFl a -EGFP-TRE-ZOl轉(zhuǎn)染后的綠色焚色結(jié)果，根據(jù)以上圖片計(jì)算得出的滴度為：Lenti-EF1 a-EGFP-

Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Z01病毒感染豬ips細(xì)胞

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]靶向Bi-1基因的重組慢病毒載體構(gòu)建及其在NIH3T3細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 李祥勇,羅海清,林觀平,周克元.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2010(12)
[2]人高遷移率族蛋白組A1基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J]. 金志良,孫新臣,成紅艷,魏青,何少忠.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2008(05)
[3]慢病毒載體構(gòu)建策略及生物安全性研究進(jìn)展[J]. 尹春光,杜立新.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(02)
[4]慢病毒載體的設(shè)計(jì)及應(yīng)用進(jìn)展[J]. 王淑艷,張愚.  中國(guó)生物工程雜志. 2006(11)

博士論文
[1]iPS細(xì)胞分化的心臟前體細(xì)胞移植改善心梗小鼠心臟功能及機(jī)制研究[D]. 劉雋煒.華中科技大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3554626