背景:多種心臟疾病可以引起心力衰竭,心力衰竭是世界范圍內(nèi)引起死亡的主要原因之一。外界刺激可以使心臟發(fā)生生理性肥大反應(yīng)或病理性肥大反應(yīng)(又稱為生理性重塑或病理性重塑)。生理性肥大是可逆的,有助于維持正常的心臟功能。生理性肥大主要表現(xiàn)為心肌細胞的適應(yīng)性生長,伴隨著心肌肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶(SERCA2a)等有益蛋白表達上調(diào)以及血管生成增加,且不會出現(xiàn)ANP、ACTC以及Myh7等胎兒基因的激活和心肌纖維化。然而,病理性肥大是不可逆的,可以使心臟功能惡化并最終引起心力衰竭。病理性肥大主要表現(xiàn)為心肌細胞的非適應(yīng)性生長、凋亡增加并伴隨有胎兒基因激活和心肌纖維化。在許多心臟疾病的早期,心肌生理性肥大及病理性肥大同時存在。因此,研究影響心臟有益和有害兩種肥大的影響因素和機制對于治療多種心臟疾病,預(yù)防心力衰竭具有重要意義。BAG3是一種在心臟、骨骼肌和一些腫瘤中高表達的蛋白質(zhì),可以調(diào)控包括發(fā)育、凋亡、自噬以及腫瘤發(fā)生發(fā)展等多個生物學過程。越來越多的研究表明BAG3在心臟中也具有重要作用,它可以促進心肌中異常折疊蛋白質(zhì)及受損細胞器的降解、抑制心肌細胞凋亡、維持心肌Z-盤的結(jié)構(gòu)完整性、調(diào)節(jié)心肌收縮力以...

【文章來源】： 中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：106 頁

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :BAG3在心肌生理性肥大和心肌病理性肥大中的作用及機制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 心臟特異性BAG3純合與雜合鼠的構(gòu)建
        2.2 小鼠游泳訓練
        2.3 小鼠皮下埋泵(持續(xù)泵入苯腎上腺素)
        2.4 超聲心動圖
        2.5 蘇木素-伊紅(H&E)染色
        2.6 Masson染色
        2.7 原代心肌細胞分離、培養(yǎng)及處理
            2.7.1 原代心肌細胞分離與純化
            2.7.2 原代心肌細胞的接種與培養(yǎng)
            2.7.3 原代心肌細胞處理
        2.8 原代心肌細胞轉(zhuǎn)染
        2.9 細胞核組分與細胞漿組分的分離
        2.10 Western blot
            2.10.1 總蛋白提取
            2.10.2 蛋白定量
            2.10.3 蛋白配置及準備
            2.10.4 SDS-PAGE電泳及轉(zhuǎn)膜
            2.10.5 封閉及抗體孵育
            2.10.6 發(fā)光
            2.10.7 使用到的抗體
        2.11 免疫熒光
        2.12 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學方法
        2.13 常用試劑配置、使用儀器及耗材清單
    3 結(jié)果
        3.1 心肌細胞生理性肥大和病理性肥大的表現(xiàn)
        3.2 小鼠心臟生理性肥大和病理性肥大的表現(xiàn)
        3.3 BAG3的表達在體內(nèi)和體外的生理性肥大與病理性肥大中上調(diào)
        3.4 心臟特異性BAG3純合與雜合敲除鼠的構(gòu)建
        3.5 心臟特異性BAG3純合與雜合敲除鼠的心臟表現(xiàn)特點
        3.6 BAG3可以在體外促進心肌生理性肥大
        3.7 BAG3可以在體內(nèi)促進心肌生理性肥大
        3.8 BAG3可以在體外抑制心肌病理性肥大
        3.9 BAG3可以在體內(nèi)抑制心肌病理性肥大
        3.10 BAG3 通過Akt-mTOR通路介導心肌生理性肥大
        3.11 BAG3 通過calcineurin-NFAT通路抑制心肌病理性肥大
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻
第二部分 :MALAT1在心肌生理性肥大和心肌病理性肥大中的作用及機制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 細胞培養(yǎng)與處理
        2.2 細胞轉(zhuǎn)染
        2.3 實時定量PCR(qRT-PCR)
            2.3.1 提取總RNA
            2.3.2 RNA濃度及純度測定
            2.3.3 逆轉(zhuǎn)錄
            2.3.4 實時定量PCR
        2.4 Western blot
            2.4.1 總蛋白提取
            2.4.2 蛋白定量
            2.4.3 蛋白配置及準備
            2.4.4 SDS-PAGE電泳及轉(zhuǎn)膜
            2.4.5 封閉及抗體孵育
            2.4.6 發(fā)光
            2.4.7 使用到的抗體
        2.5 熒光素酶報告基因
        2.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學方法
        2.7 常用試劑配置
    3 結(jié)果
        3.1 MALAT1的表達在生理性肥大和病理性肥大的細胞中升高
        3.2 敲減MALAT1抑制了心肌病理性肥大,而對生理性肥大無明顯作用
        3.3 MALAT1與microRNA-26a之間的相互作用
        3.4 敲減MALAT1 通過mi R-26a抑制了GATA4 蛋白的表達
        3.5 MALAT1對PE誘導的心肌病理性肥大的影響是通過mi R-26a介導的
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻
本研究的創(chuàng)新性自我評價
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Pro?ling and Validation of the Circular RNA Repertoire in Adult Murine Hearts [J]. Tobias Jakobi,Lisa F.Czaja-Hasse,Richard Reinhardt,Christoph Dieterich.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(04)



本文編號：3548830