目的:本研究主要觀察PRMT2基因?qū)θ四氺o脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）凋亡的影響,并探討其可能機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)以HUVECs作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PRMT2高表達(dá)及低表達(dá)質(zhì)粒。通過熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)GFP綠色熒光蛋白表達(dá)情況,運(yùn)用PCR,Western blot技術(shù)檢測(cè)PRMT2在細(xì)胞中的表達(dá)情況。MTT法觀察PRMT2對(duì)HUVECs和細(xì)胞活力的影響。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察PRMT2對(duì)HUVECs遷移率的影響。Western blot分別檢測(cè)PRMT2對(duì)HUVECs凋亡相關(guān)蛋白Bcl2、Bax、caspase-3的表達(dá)情況。結(jié)果:1)PRMT2高表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HUVECs成功后細(xì)胞內(nèi)PRMT2-mi RNA及PRMT2蛋白表達(dá)水平明顯增高,PRMT2低表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HUVECs成功后細(xì)胞內(nèi)PRMT2-mi RNA及PRMT2蛋白表達(dá)水平明顯降低。2)PRMT2高表達(dá)明顯抑制HUVECs的細(xì)胞活力和遷移,同時(shí)上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Bax、caspase-3表達(dá)水平,下調(diào)Bcl-2表達(dá)水平。3)PRMT2低表達(dá)明顯增加HUVECs的細(xì)胞活力,并且明顯促進(jìn)HUVECs的遷移,... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

熒光倒置顯微鏡觀察HUVECs內(nèi)GFP綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染情況

圖 4.2 A1:PCR 檢測(cè) HUVECs 內(nèi) PRMT2-miRNA 表達(dá)情況；B1:為 A1 的統(tǒng)計(jì)A2:Western Blot 檢測(cè) HUVECs 內(nèi) PRMT2 蛋白表達(dá)情況；B2:為 A2 的統(tǒng)計(jì)注：*P<0.05；與 CON 組相比4.1.2 PRMT 低表達(dá)抑制 PRMT2-miRNA，PRMT2 蛋白的表達(dá)采用 Lipofectamine2000 將 LacZ-miRNA 空載質(zhì)粒（NC），pcDNA6.2-GW/EmGFP-PRMT2-miRNA1 低表達(dá)質(zhì)粒（PRMT2-miRNA1）pcDNA6.2-GW/EmGFP-PRMT2-miRNA2 低表達(dá)質(zhì)粒（PRMT2-miRNA2）HUVECs 內(nèi)，培養(yǎng) 24h 后在熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光強(qiáng)度，熒光4.3），除空白對(duì)照（CON）組外，其它各組均可見綠色熒光蛋白（GFP）染 HUVECs 成功。為檢測(cè)目的基因表達(dá)情況，采用 PCR 和 Western blot 分PRMT2 的表達(dá)。PCR 結(jié)果顯示，PRMT2-miRNA1 和 PRMT2-miRNA2 組NC 組相比，PRMT2-miRNA 的表達(dá)水平在 HUVECs 細(xì)胞中顯著下調(diào)，差

培養(yǎng) 24h 后在熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光強(qiáng)度，熒光結(jié)果顯示（圖4.3），除空白對(duì)照（CON）組外，其它各組均可見綠色熒光蛋白（GFP），說明質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 HUVECs 成功。為檢測(cè)目的基因表達(dá)情況，采用 PCR 和 Western blot 分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)PRMT2 的表達(dá)。PCR 結(jié)果顯示，PRMT2-miRNA1 和 PRMT2-miRNA2 組與 CON 組，NC 組相比，PRMT2-miRNA 的表達(dá)水平在 HUVECs 細(xì)胞中顯著下調(diào)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]線粒體膜通透性變化與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J]. 叢義梅,李鑫,賈紅玲,關(guān)偉軍,馬月輝.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2008(10)

博士論文
[1]E.tenella宿主細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)在線粒體凋亡途徑中的作用與機(jī)理[D]. 崔小珍.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]溴氰菊酯神經(jīng)細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究[D]. 陳丹.華中科技大學(xué) 2006
[3]半邊蓮生物堿和山梗菜堿對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制研究[D]. 范秀珍.山東大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3548069