目的:本研究主要觀察PRMT2基因?qū)θ四氺o脈血管內(nèi)皮細胞（HUVECs）凋亡的影響,并探討其可能機制。方法:本實驗以HUVECs作為實驗研究對象,分別瞬時轉(zhuǎn)染PRMT2高表達及低表達質(zhì)粒。通過熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細胞內(nèi)GFP綠色熒光蛋白表達情況,運用PCR,Western blot技術(shù)檢測PRMT2在細胞中的表達情況。MTT法觀察PRMT2對HUVECs和細胞活力的影響。細胞劃痕實驗觀察PRMT2對HUVECs遷移率的影響。Western blot分別檢測PRMT2對HUVECs凋亡相關(guān)蛋白Bcl2、Bax、caspase-3的表達情況。結(jié)果:1)PRMT2高表達質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染HUVECs成功后細胞內(nèi)PRMT2-mi RNA及PRMT2蛋白表達水平明顯增高,PRMT2低表達質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染HUVECs成功后細胞內(nèi)PRMT2-mi RNA及PRMT2蛋白表達水平明顯降低。2)PRMT2高表達明顯抑制HUVECs的細胞活力和遷移,同時上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Bax、caspase-3表達水平,下調(diào)Bcl-2表達水平。3)PRMT2低表達明顯增加HUVECs的細胞活力,并且明顯促進HUVECs的遷移,... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

熒光倒置顯微鏡觀察HUVECs內(nèi)GFP綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染情況

圖 4.2 A1:PCR 檢測 HUVECs 內(nèi) PRMT2-miRNA 表達情況；B1:為 A1 的統(tǒng)計A2:Western Blot 檢測 HUVECs 內(nèi) PRMT2 蛋白表達情況；B2:為 A2 的統(tǒng)計注：*P<0.05；與 CON 組相比4.1.2 PRMT 低表達抑制 PRMT2-miRNA，PRMT2 蛋白的表達采用 Lipofectamine2000 將 LacZ-miRNA 空載質(zhì)粒（NC），pcDNA6.2-GW/EmGFP-PRMT2-miRNA1 低表達質(zhì)粒（PRMT2-miRNA1）pcDNA6.2-GW/EmGFP-PRMT2-miRNA2 低表達質(zhì)粒（PRMT2-miRNA2）HUVECs 內(nèi)，培養(yǎng) 24h 后在熒光倒置顯微鏡下觀察細胞熒光強度，熒光4.3），除空白對照（CON）組外，其它各組均可見綠色熒光蛋白（GFP）染 HUVECs 成功。為檢測目的基因表達情況，采用 PCR 和 Western blot 分PRMT2 的表達。PCR 結(jié)果顯示，PRMT2-miRNA1 和 PRMT2-miRNA2 組NC 組相比，PRMT2-miRNA 的表達水平在 HUVECs 細胞中顯著下調(diào)，差

培養(yǎng) 24h 后在熒光倒置顯微鏡下觀察細胞熒光強度，熒光結(jié)果顯示（圖4.3），除空白對照（CON）組外，其它各組均可見綠色熒光蛋白（GFP），說明質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 HUVECs 成功。為檢測目的基因表達情況，采用 PCR 和 Western blot 分別檢測細胞內(nèi)PRMT2 的表達。PCR 結(jié)果顯示，PRMT2-miRNA1 和 PRMT2-miRNA2 組與 CON 組，NC 組相比，PRMT2-miRNA 的表達水平在 HUVECs 細胞中顯著下調(diào)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]線粒體膜通透性變化與細胞凋亡的關(guān)系[J]. 叢義梅,李鑫,賈紅玲,關(guān)偉軍,馬月輝.  中國畜牧獸醫(yī). 2008(10)

博士論文
[1]E.tenella宿主細胞鈣穩(wěn)態(tài)在線粒體凋亡途徑中的作用與機理[D]. 崔小珍.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]溴氰菊酯神經(jīng)細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制的研究[D]. 陳丹.華中科技大學(xué) 2006
[3]半邊蓮生物堿和山梗菜堿對人血管內(nèi)皮細胞保護作用的機制研究[D]. 范秀珍.山東大學(xué) 2005



本文編號：3548069