目的：篩選核仁素調(diào)控的miRNAs,在心肌損傷模型中觀察核仁素及其調(diào)控的miRNAs在心肌保護中的作用,探討核仁素是否通過調(diào)控miRNA的生成在損傷心肌中發(fā)揮保護作用,初探核仁素調(diào)控miRNAs的可能機制。方法：通過核仁素轉(zhuǎn)基因小鼠,采用高通量技術篩選出受核仁素調(diào)控的miRNAs,并通過qRT-PCR（實時定量-逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應）進行驗證。構建小鼠阿霉素心肌損傷與心肌缺血-再灌注損傷模型,通過Western-blot及qRT-PCR檢測核仁素及其調(diào)控的miRNA在這兩種模型中的表達情況。采用核仁素過表達或表達抑制以及“獲得或失去功能實驗”（gain-and loss of-function experiment）觀察核仁素及其調(diào)控的miRNAs對阿霉素、H2O2所致的心肌細胞損傷的影響,觀察核仁素是否通過調(diào)控miRNAs生成在損傷心肌細胞中發(fā)揮保護作用。通過生物信息學軟件預測重要miRNAs的靶mRNAs,并觀察其在阿霉素處理的心肌細胞中的表達情況,旨在尋找miRNAs可能的作用靶點。通過RNA免疫共沉淀技術（RNA-IP）和蛋白質(zhì)免疫共沉淀技術（IP）篩選心肌組織中與核仁素發(fā)生相... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

心肌特異性高表達核仁素小鼠的建立與鑒定

圖1-2.高通量歸選核仁素轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠心肌組織中差異表達miRNAsFig 1-2. Thermal map of differentially expressed miRNAs between nucleolin transgenic wild type mice .表1 miRNAs芯片顯示，核仁素轉(zhuǎn)基因小鼠心肌中表達上調(diào)的miRNAsTablel. Up-regulated miRNAs in myocardium of nucleolin transgenic miceNo. Name Regulation No. Name Regulation1 ninui-miR-320 up 9 niiiiii-iniR-29b up2 niinu-miR-21 up 10 niiiiu-niiR-208b up3 niiiiu-miR-146b up 11 mimi-miR-29a* up4 immx-miR-223 up 12 nmiu-miR-222 up5 iiiimi-miR-214 up 13 niiiiu-miR-146a up6 minu-iniR-195 up 14 mmu-miR-214* up7 niiiiu-imR-19ya-5p up 15 iiiiiiu-miR-34a up8 imiiu-miR-690 up 16 niniu-miR-27a up

位論文 qRT-PCR驗證基因芯片中兩組之間表達差異的miRNAs高通量蹄選是一種以初蹄為目的的蹄選技術，往往需要進一步驗證明兩組之間差異表達的miRNAs,我們采用qRT-PCR分146b, miR-320, miR21, miR-1, miR-133, miR-378。發(fā)現(xiàn) miR-320 片結果一致，在核仁素轉(zhuǎn)基因小鼠心肌組織中表達上調(diào)（圖1-3A)，378與芯片結果一致，在核仁素轉(zhuǎn)基因小鼠心肌組織中表達下調(diào)（miR-21在兩組之間差異具有顯著性，尸<0.01,論3。A rm WT

【參考文獻】：
期刊論文
[1]miRNA-711-SP1-collagen-I pathway is involved in the anti-fibrotic effect of pioglitazone in myocardial infarction[J]. ZHAO Na,YU HaiYi,YU HaiTao,SUN Min,ZHANG YouYi,XU Ming,GAO Wei.  Science China（Life Sciences）. 2013(05)



本文編號：3544220