目的:分離Brugada綜合征（Brugada Syndrome,BrS）患者外周血單核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC）建立特異性誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞（Induced pluripotent Stem cells,iPSC）系,為后期探討B(tài)rS的發(fā)病機(jī)制提供疾病模型。方法:從一例明確診斷BrS的患者中收集外周靜脈血,分離PBMC。將包含四個(gè)特異性因子OCT4,SOX2,KLF4和CMYC的仙臺(tái)病毒轉(zhuǎn)染到PBMC。通過免疫熒光染色、流式細(xì)胞技術(shù)、三胚層分化等方法檢測(cè)iPSC的多功能性。通過Giemsa染色技術(shù)進(jìn)行iPSC核型分析。通過STR分析鑒定iPSC細(xì)胞生長(zhǎng)情況。結(jié)果誘導(dǎo)的iPSC呈典型的胚胎干細(xì)胞樣克隆,符合干細(xì)胞的基本特性。其次iPSC具有三胚層分化發(fā)育能力。結(jié)論iPSC能夠通過人的PBMC獲得并且具有能夠分化為多種類型細(xì)胞的能力,此特點(diǎn)為進(jìn)一步研究BrS發(fā)病機(jī)制提供了完整而有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)建模方法。并為后續(xù)將iPSC定向分化為心肌細(xì)胞,研究BrS的發(fā)病機(jī)制、治療方法奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

外周血單個(gè)核細(xì)胞的形態(tài)

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文11結(jié)果1外周血單個(gè)核細(xì)胞的生成我們通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)過程從BrS病人的外周血，成功分離出PBMC。在顯微鏡下可以見到大量生長(zhǎng)活躍，圓形、體積較孝呈現(xiàn)出貼壁生長(zhǎng)的PBMC，且數(shù)量大量增加。（見圖1）圖1外周血單個(gè)核細(xì)胞的形態(tài)Fig.1MorphologyofPBMC2BrS來源iPSC的生成我們用BrS患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞成功的誘導(dǎo)出了iPSC，并在顯微鏡下觀察到大量干細(xì)胞一樣的克隆狀態(tài)。細(xì)胞正在活躍地生長(zhǎng)，擁有明顯的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，并且其數(shù)目正在顯著增加。（見圖2）圖2iPSC的克隆細(xì)胞團(tuán)Fig.2iPSCclonedcellmass

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文14c.內(nèi)胚層(AFP)Hoechst染色細(xì)胞核。Merge為重疊圖片。a.外胚層(PAX-6)染色結(jié)果。b.中胚層(Brachyury)染色結(jié)果。c.內(nèi)胚層(AFP)染色結(jié)果。比例尺=50μm。Hoechststainednuclei.Mergeisanoverlappingpicture.a.FluorescenceimageofEtodermccells(PAX-6).b.FluorescenceimageofMesodermcells(Brachyury).c.FluorescenceimageofEdodermcells(AFP).Scale=50μm.n圖5iPSC體外三胚層分化能力Fig.5Three-germlayersofiPSC4核型鑒定為了檢查衍生的iPSC的遺傳穩(wěn)定性，使用標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)進(jìn)行了核型分析。通過吉姆薩染色檢查iPSC系的核型，結(jié)果顯示正常的二倍體46,XY核型，未發(fā)現(xiàn)任何異常。（如圖6）圖6BrSiP-SCs染色體核型分析Fig.6ThekaryotypeoftheiPSC

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3540037