因異常的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增生、遷移以及對(duì)凋亡的抵抗引起的小肺動(dòng)脈重構(gòu)是肺動(dòng)脈高壓的重要病理特征。然而,正常的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增生與凋亡之間的平衡如何被破壞,如何轉(zhuǎn)變?yōu)楦咴錾鷥A向并抵抗凋亡,其中的細(xì)胞和分子機(jī)制仍不明確。最近在惡性疾病中的研究表明,由不同原因?qū)е碌膬?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能是促使細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的共同因素。聯(lián)系到各種類型的肺動(dòng)脈高壓均存在不同程度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,后者可能在肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增生性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用。脂鈣蛋白-2（Lipocalin2, Lcn2）,又被稱為中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)的Lipocalin （NGAL）,近來(lái)發(fā)現(xiàn)其在很多良惡性疾病中對(duì)細(xì)胞的生存發(fā)揮重要作用。Lcn2可促進(jìn)細(xì)胞攝取鐵,而鐵可促進(jìn)細(xì)胞氧化應(yīng)激；Lcn2可促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲,并促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化；針對(duì)不同類型的細(xì)胞,Lcn2具有促進(jìn)或抑制凋亡的作用。Lcn2的這些功能作用均與肺動(dòng)脈高壓時(shí)發(fā)生的病理變化密切相關(guān),而目前尚未見(jiàn)Lcn2與肺動(dòng)脈高壓相關(guān)的研究報(bào)道,這促使我們對(duì)Lcn2在肺動(dòng)脈高壓中的可能作用展開(kāi)研究。本研究主要考察了Lcn2對(duì)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡、增生、遷移的影響,以及相關(guān)的分子機(jī)理；考察了在野百合... 

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圖I-ITUNEL法檢測(cè)Lcn2對(duì)HPASMC凋亡的作用:應(yīng)用血清撤退(SD)、過(guò)氧化氫

圖1-2 TUNEL法檢測(cè)Lcn2對(duì)HPASMC調(diào)亡的作用——定量分析：卜:TUNEL丨，測(cè)川麓機(jī)選取5個(gè)i(;j倍視野(400X )，計(jì)兌HPASMC卞?均岡丨、:率。*? p<0.05。2 Lcn2抑制Caspase-3裂解和活性Caspase-3作為多種凋1、:通路的共同環(huán)丨Y和?奶的闕Cr效應(yīng)分f，在細(xì)胞闕亡屮作⑴。我們檢測(cè)了 3種凋亡投:?屮，足Lcn2抑制細(xì)胞調(diào)Caspase-3 Yj'義。來(lái)丨11 Western-Blot的力?法，我們分析/ Caspase-3及il:裂解生成的；性片段（C-casp3，17Kd),結(jié)果農(nóng)明Lcn2處理組的C-casp3條帶均較對(duì)照組減弱，即Lcn2抑制了 Caspase-3的裂解沾化。定.?分析及叫抑制作Wj均H?有顯著性（丨到1-5A)。3種丨)丨彳：！亡模嘲屮，對(duì)Caspase-3 _沾作的檢測(cè)Hi農(nóng)明Lcn2顯普抑制了 Caspase-3 的沾化（閣 1-5B)。17

丨I、:余孔小.處現(xiàn)，rrc孵ff 20分鐘；(2)棄坊養(yǎng)液，PBS洗2次/|1，0.25%胰酶消化細(xì)胞，■懸T細(xì)胞培界液巾(1-10X 106 cell/ml： Iif以存血沾和盼紅）；(3)加入1:?的JC-1染色丨：作液，顛倒數(shù)次37T:_i^"20分鐘；(4) 4°C、1000 rpm離心細(xì)胞5分鐘，介」?.沾?，用冰冷的JC-1染色緩沖液（IX)洗潘細(xì)胞2次jTi，適M JC-1染色緩沖液（IX) Sty;細(xì)胞；(5)采丨丨j常用的檢測(cè)紅綠色炎光的參數(shù)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)相應(yīng)樣品的炎光強(qiáng)度。4.6 RT^PCR 用引物 Human GRP78 forward 5，- GAACGTCTGATTGGCGATGC -3’Human GRP78 reverse 5'- ACCACCTTGAACGGCAAGAA -3’Human Nogo forward 5'- GAGGGTGAGTCACGCCAAA -3’Human Nogo reverse 5，- TCCCGGAACAATGAGACTGC -3'Human (3-actin forward 5 TGTTTGAGACCTTCAACACC -3 ’Human p-actin reverse 5'- TGTTTGAGACCTTCAACACC -3’Ki67 DAPI merge


本文編號(hào)：3539361

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