SUMO特異性蛋白酶3通過調(diào)控巨噬細胞極化促進磷酸鈣誘導(dǎo)的小鼠腹主動脈瘤形成
發(fā)布時間：2021-12-12 11:08
目的:探討SUMO特異性蛋白酶3（SENP3）調(diào)控巨噬細胞極化在磷酸鈣誘導(dǎo)的小鼠腹主動脈瘤（AAA）形成中的作用。方法:（1）分離C57BL/6背景的Senp3flox/flox（野生型,WT）小鼠和Senp3flox/flox;Lyz2-Cre（SENP3單核細胞特異性敲除,即條件性敲除,c KO）小鼠骨髓來源的單核細胞（BMDMs）,分別誘導(dǎo)其M1/M2型分化,采用RT-q PCR、Western blot和細胞免疫熒光比較SENP3表達以及M1/M2型巨噬細胞分布差異。（2）8～12周齡雄性WT小鼠和c KO小鼠用改良型磷酸鈣誘導(dǎo)14 d構(gòu)建小鼠AAA模型,比較兩組小鼠的成瘤率和生存率;RT-q PCR和Western blot檢測SENP3、白細胞介素1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNFα）、IL-6及基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）在兩組小鼠AAA組織中的表達差異;二氫乙啶染色檢測組織中活性氧簇（ROS）生成差異。（3）為探討其中機制,通過Western blot和免疫共沉淀驗證SENP3與絲裂原活化蛋白激酶激酶7（MKK7）的...
【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(05)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：10 頁
【部分圖文】：
巨噬細胞M1極化和M1/M2轉(zhuǎn)化過程中SENP3表達上調(diào)
RT-qPCR和Western blot檢測結(jié)果顯示，cKO小鼠BMDMs中，SENP3表達顯著降低（P<0.01），見圖3A。cKO雄鼠和同窩出生的WT雄鼠AAA造模結(jié)果顯示，cKO小鼠腹主動脈成瘤較小或無法形成AAA，見圖3B，相應(yīng)地，cKO組AAA造模小鼠生存率顯著高于WT組（P<0.05），見圖3C。改良磷酸鈣法誘導(dǎo)的AAA中cKO小鼠AAA發(fā)生率顯著低于WT組（P<0.05），見圖3D;WT小鼠中，磷酸鈣誘導(dǎo)的AAA主動脈瘤體外部直徑和動脈重/總體重比值均高于cKO組（P<0.05），見圖3E、F。HE染色可見正常動脈具備清晰、完整的彈力板層將內(nèi)、中、外膜分開，動脈無異常擴張，內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞排列整齊；而造模后，WT組發(fā)生AAA的動脈擴張和增厚程度比cKO組嚴重，見圖3G。此外，VVG染色可見cKO組僅有少量或無內(nèi)彈性膜崩解及彈性纖維斷裂（黑色著色為彈性纖維），而WT組的彈性纖維斷裂更為嚴重，纖維斷裂等級數(shù)據(jù)的差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性（P<0.05），見圖3G、H。4 SENP3敲除抑制AAA的炎癥和氧化應(yīng)激
哺乳動物體內(nèi)目前共發(fā)現(xiàn)有7種SENPs，其中SENP3對氧化應(yīng)激最為敏感[16-17]，主要介導(dǎo)底物蛋白的去除SUMO2/3修飾（de-SUMO2/3修飾），在腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移和炎癥細胞的激活中發(fā)揮重要作用。同時，在免疫應(yīng)答條件下巨噬細胞極化成M1型，線粒體中大量生成ROS，在氧化應(yīng)激環(huán)境下分泌釋放大量的炎癥因子，放大炎癥損傷[5]。本研究表明SENP3在巨噬細胞M1/M2極化時存在表達差異，并且敲除SENP3能改變M1/M2巨噬細胞的誘導(dǎo)分布，這提示SENP3也參與調(diào)控巨噬細胞M1和M2表型轉(zhuǎn)換。人類外周血單核細胞衍生的巨噬細胞蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析顯示，AAA與非AAA外周動脈疾病的患者之間，巨噬細胞的蛋白和基因表達譜存在顯著差異，其中差異表達的基因和蛋白質(zhì)富集在與AAA相關(guān)的ECM重塑和炎癥等方面，表明單核-巨噬細胞譜系在AAA的ECM重塑或炎癥過程具有重要作用[18]。在體外，cKO小鼠的M0受刺激后發(fā)生M1極化的比例降低，而在磷酸鈣誘導(dǎo)的腹主動脈瘤小鼠模型中，SENP3敲除能夠有效降低AAA的氧化應(yīng)激損傷、炎癥反應(yīng)和ECM重塑，從而導(dǎo)致AAA發(fā)病減少和小鼠存活率的升高。以上結(jié)果表明，SENP3介導(dǎo)的巨噬細胞M1極化可促進AAA發(fā)生和進展。2 SENP3促進巨噬細胞炎癥反應(yīng)并調(diào)控ECM的機制
【參考文獻】：
期刊論文
[1]法舒地爾調(diào)控巨噬細胞極化改善糖尿病小鼠心肌纖維化[J]. 謝發(fā)江,蔣松辰,高尚遠,李燕,冉茂霞,李家富,馮健. 中國病理生理雜志. 2019(05)
[2]應(yīng)用光學(xué)相干斷層掃描成像技術(shù)分析比較急慢性中心性漿液性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變的變化[J]. 許發(fā)寶,周立軍,鞏亞軍,賴坤貝,黃創(chuàng)新,李龍輝,呂林,金陳進. 中國病理生理雜志. 2018(06)
[3]LRRK2/NF-κB信號對BCG誘導(dǎo)巨噬細胞RAW264.7炎癥應(yīng)答的調(diào)控[J]. 王啟源,徐紅艷,姬文蘭. 中國病理生理雜志. 2018(03)
本文編號：3536566
【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(05)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：10 頁
【部分圖文】：
巨噬細胞M1極化和M1/M2轉(zhuǎn)化過程中SENP3表達上調(diào)
RT-qPCR和Western blot檢測結(jié)果顯示，cKO小鼠BMDMs中，SENP3表達顯著降低（P<0.01），見圖3A。cKO雄鼠和同窩出生的WT雄鼠AAA造模結(jié)果顯示，cKO小鼠腹主動脈成瘤較小或無法形成AAA，見圖3B，相應(yīng)地，cKO組AAA造模小鼠生存率顯著高于WT組（P<0.05），見圖3C。改良磷酸鈣法誘導(dǎo)的AAA中cKO小鼠AAA發(fā)生率顯著低于WT組（P<0.05），見圖3D;WT小鼠中，磷酸鈣誘導(dǎo)的AAA主動脈瘤體外部直徑和動脈重/總體重比值均高于cKO組（P<0.05），見圖3E、F。HE染色可見正常動脈具備清晰、完整的彈力板層將內(nèi)、中、外膜分開，動脈無異常擴張，內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞排列整齊；而造模后，WT組發(fā)生AAA的動脈擴張和增厚程度比cKO組嚴重，見圖3G。此外，VVG染色可見cKO組僅有少量或無內(nèi)彈性膜崩解及彈性纖維斷裂（黑色著色為彈性纖維），而WT組的彈性纖維斷裂更為嚴重，纖維斷裂等級數(shù)據(jù)的差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性（P<0.05），見圖3G、H。4 SENP3敲除抑制AAA的炎癥和氧化應(yīng)激
哺乳動物體內(nèi)目前共發(fā)現(xiàn)有7種SENPs，其中SENP3對氧化應(yīng)激最為敏感[16-17]，主要介導(dǎo)底物蛋白的去除SUMO2/3修飾（de-SUMO2/3修飾），在腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移和炎癥細胞的激活中發(fā)揮重要作用。同時，在免疫應(yīng)答條件下巨噬細胞極化成M1型，線粒體中大量生成ROS，在氧化應(yīng)激環(huán)境下分泌釋放大量的炎癥因子，放大炎癥損傷[5]。本研究表明SENP3在巨噬細胞M1/M2極化時存在表達差異，并且敲除SENP3能改變M1/M2巨噬細胞的誘導(dǎo)分布，這提示SENP3也參與調(diào)控巨噬細胞M1和M2表型轉(zhuǎn)換。人類外周血單核細胞衍生的巨噬細胞蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析顯示，AAA與非AAA外周動脈疾病的患者之間，巨噬細胞的蛋白和基因表達譜存在顯著差異，其中差異表達的基因和蛋白質(zhì)富集在與AAA相關(guān)的ECM重塑和炎癥等方面，表明單核-巨噬細胞譜系在AAA的ECM重塑或炎癥過程具有重要作用[18]。在體外，cKO小鼠的M0受刺激后發(fā)生M1極化的比例降低，而在磷酸鈣誘導(dǎo)的腹主動脈瘤小鼠模型中，SENP3敲除能夠有效降低AAA的氧化應(yīng)激損傷、炎癥反應(yīng)和ECM重塑，從而導(dǎo)致AAA發(fā)病減少和小鼠存活率的升高。以上結(jié)果表明，SENP3介導(dǎo)的巨噬細胞M1極化可促進AAA發(fā)生和進展。2 SENP3促進巨噬細胞炎癥反應(yīng)并調(diào)控ECM的機制
【參考文獻】：
期刊論文
[1]法舒地爾調(diào)控巨噬細胞極化改善糖尿病小鼠心肌纖維化[J]. 謝發(fā)江,蔣松辰,高尚遠,李燕,冉茂霞,李家富,馮健. 中國病理生理雜志. 2019(05)
[2]應(yīng)用光學(xué)相干斷層掃描成像技術(shù)分析比較急慢性中心性漿液性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變的變化[J]. 許發(fā)寶,周立軍,鞏亞軍,賴坤貝,黃創(chuàng)新,李龍輝,呂林,金陳進. 中國病理生理雜志. 2018(06)
[3]LRRK2/NF-κB信號對BCG誘導(dǎo)巨噬細胞RAW264.7炎癥應(yīng)答的調(diào)控[J]. 王啟源,徐紅艷,姬文蘭. 中國病理生理雜志. 2018(03)
本文編號：3536566
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