第一部分?jǐn)U增重組腺病毒GFP、Wnt3a、BMP9并分別轉(zhuǎn)染C3H10T1/2細(xì)胞目的：擴(kuò)增能高度表達(dá)GFP、Wnt3a、BMP9蛋白的重組腺病毒,并檢測(cè)分別轉(zhuǎn)染C3H10T1/2細(xì)胞后的穩(wěn)定性。方法：復(fù)蘇HEK293細(xì)胞并培養(yǎng),待其增殖生長(zhǎng)至約培養(yǎng)瓶底面積的70%～80%,進(jìn)行反復(fù)傳代兩次后,向細(xì)胞中分別加入適量的AdEasyGFP、AdEasyWnt3a、AdEasyBMP9原液,搖晃均勻后培養(yǎng)48-72h觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯的改變后,即可收集細(xì)胞懸液。于倒置相差顯微鏡下觀察復(fù)蘇培養(yǎng)的C3H10T1/2細(xì)胞,待其生長(zhǎng)鋪滿至約培養(yǎng)瓶底面積的70%時(shí),加入適量已成功收集的腺病毒液,48h后利用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)分別觀察腺病毒轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞生長(zhǎng)變化及轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果：1、AdEasyGFP、AdEasyWnt3a、AdEasyBMP9在HEK293細(xì)胞中反復(fù)擴(kuò)增后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,即收集到了能夠高度表達(dá)GFP、Wnt3a、BMP9蛋白的腺病毒液。2、鏡下觀察經(jīng)BMP9、Wnt3a及二者聯(lián)合轉(zhuǎn)染C3H10T1/2細(xì)胞1周后,可見BMP9組、Wnt3a聯(lián)合BMP9組細(xì)胞呈現(xiàn)纖維樣生長(zhǎng)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

流式細(xì)施術(shù)檢瀏轉(zhuǎn)染效率

??引物無二聚體產(chǎn)物產(chǎn)生且穩(wěn)定性好，見圖２．３。??？????Ｄ??＊？？■？??？??ｍＵｒｉｉＤ．??ｎ??＊？?一??狂在狂往??ｔ?？?ｒ－＇ｉｒ，ｆ?，■?Ｉ?ｔ?ｐ?＇?＇?ｉ?ｒ?？?Ｂ??二ＩＢＭ?ｉＭｎｏｍ?ｉＭｉｎ?ｔｉ—…，Ｍｗ??Ａ＊?Ｂ：?ＧＡＴＡ４?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?Ｍｅｌｔ?ｃｕｒｖｅ；?Ｃ－．?Ｄ：?ＩＭＥＦ２Ｃ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?Ｍｅｌｔ?ｃｕｒｖｅ??圖２．３基因ｒ增溶解曲線??Ｆｉｇ?２．３?Ｇｅｎｅ?ａｍｐｌｉＵｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?Ｍｅｌｔ?ｃｕｒｖｅ??２．３．３腺病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞３周時(shí)，各組細(xì)胞中均可檢測(cè)到有ＧＡＴＡ４和ＭＥＦ２Ｃ的表??達(dá)，而空白組、ＧＦＰ組和Ｗｎｔ３ａ組的表達(dá)皇均化于其余兩組（ｐ＜０．０５）?；?ＢＭＰ９??組ＭＥＦ２Ｃ的相對(duì)表達(dá)量思著高于Ｗｎｔ３ａ聯(lián)合ＢＭＰ９組（／？＜０．〇ｎ，見圖２．４。??２．０－１?ａ?巧＿＾??ａ??‘１５－?ｂｅ??的?１０－??１—１１??古?１?０－廣—ｐＴＨ．??苦?；Ｍ?？?ｉ?Ｉ?５－?ｂ??畫?０．５－?ｉ?ｉｕｈＴｍｈ??〇＇〇ＩＬ．．，Ｊ?Ｌ．

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本文編號(hào)：3527806