目的：采用分子生物學(xué)方法,以細(xì)胞水平為平臺,觀察促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin,EPO）對高糖環(huán)境誘導(dǎo)過程中體外培養(yǎng)的乳鼠心臟成纖維細(xì)胞（Cardiac Fibroblasts,CFs）的增殖及其表型轉(zhuǎn)化的影響。方法：（1）原代細(xì)胞培養(yǎng)：取1-3天內(nèi)SD乳鼠的心室肌,雙酶消化法體外分離、培養(yǎng)乳鼠CFs細(xì)胞,使用貼壁較早的乳鼠心臟成纖維細(xì)胞（CFs）,培養(yǎng)并傳代后,使用生長良好的第2-3代細(xì)胞。（2）藥物干預(yù)：在促進(jìn)CFs細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的過程中,選用25mmol/L的高糖培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo),添加20U/ml的EPO對CFs細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),分別將同一批細(xì)胞隨機(jī)分為三組：對照組（葡萄糖終濃度5.5mmol/L）、高糖組（葡萄糖終濃度25mmol/L）、高糖+EPO組（葡萄糖終濃度25mmol/L+20U/ml）.（3）免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定成纖維細(xì)胞：使用生長良好的CFs細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞爬片,細(xì)胞爬片后用免疫組化SABC法進(jìn)行鑒定,免疫組化結(jié)果應(yīng)為Fibronectin和vimentin陽性,a-actin陰性,可被證實為心臟成纖維細(xì)胞。（4） ELISA檢測Ⅰ型、Ⅲ型膠原含量：采用雙抗體兩步... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖ICollagen[含量繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線

CollagenIII含量繪制的標(biāo)準(zhǔn)冊線

圖1-1分離培養(yǎng)CFS(lOOX)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3527238