目的：研究人SLC22A3基因intron7及其SNP位點(diǎn)rs204832（7A/G）對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)作用。方法：以包含人SLC22A3基因全長(zhǎng)序列的細(xì)菌人工染色體（BAC）為模板，PCR擴(kuò)增人SLC22A3intron7，克隆入熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-Basic和pGL3-Promoter，得到野生型重組質(zhì)pGL3-Basic-SLCi7wt和pGL3-Promoter-SLCi7wt；以pGL3-Promoter-SLCi7wt為模板，行PCR定點(diǎn)誘變，構(gòu)建突變型重組質(zhì)粒pGL3-Promoter-SLCi7mut。重組質(zhì)粒與內(nèi)參質(zhì)粒pRL-SV40共轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞HEK293T，24h后檢測(cè)熒光素酶活性。利用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0分析各組熒光素酶活性之間的差異。結(jié)果：成功構(gòu)建了包含野生型和突變型人SLC22A3intron7的重組質(zhì)粒pGL3-Basic-SLCi7wt、 pGL3-Promoter-SLCi7wt以及pGL3-Promoter-SLCi7mut。野生型重組質(zhì)粒pGL3-Basic-SLCi7wt熒光素酶活性與pGL3-Basic無(wú)顯著差異（P=0.986... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人SLC22A3基因intron7PCR產(chǎn)物

變型 hSLC22A3 intron7 重組質(zhì)粒的構(gòu)建突變型重組質(zhì)粒的酶切鑒定野生型重組質(zhì)粒 pGL3-Promoter-SLCi7wt 為模板，行 PCR 定點(diǎn)誘變重組質(zhì)粒 pGL3-Promoter-SLCi7mut；重組質(zhì)粒行 HindIII 酶切鑒定，1%瓊脂糖凝膠電泳可見(jiàn)：pGL3-Promoter-SLCi7mut 酶切后得到 727 b580 bp 和 5471 bp 四條 DNA 條帶，酶切鑒定結(jié)果與理論預(yù)期一致（圖突變型重組質(zhì)粒的測(cè)序驗(yàn)證組質(zhì)粒經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證，結(jié)果顯示：SNP 位點(diǎn) rs2048327 堿基由野生型（型（G），與預(yù)期一致（圖 3），提示突變型重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。

1 2 3 41: pGL3-Control（陽(yáng)性對(duì)照）; 2：pGL3-Promoter（陰性對(duì)照）;3：pGL3-Promoter-SLCi7wt; 4: pGL3-Promoter-SLCi7mut.圖 5 pGL3-Promoter 重組質(zhì)粒熒光素酶活性(x± s )fig.5 The luciferase activities detected from HEK293Tcells transfected with pGL3-Promoter recombinant plasmids ( ± s )D 是一種具有嚴(yán)重危害性的多基因遺傳性疾病，對(duì)其易感基因及遺傳具有重要意義。2009 年 Trégou t 等首次提出 SLC22A3 基因?yàn)?CAD

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SLC22A3-LPAL2-LPA基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病的關(guān)系研究[J]. 丁艷輝,柳青,雷寒.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(22)



本文編號(hào)：3524506