目的探討CD137-CD137L信號是否通過c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）通路影響小鼠血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）自噬。方法組織塊貼壁法進(jìn)行C57BL/6J小鼠胸主動脈VSMCs原代培養(yǎng)。將培養(yǎng)的原代小鼠VSMCs分為四組,即對照組、CD137激動組、DMSO（二甲基亞砜）組及JNK抑制組。采用Western blot檢測各組磷酸化c-Jun氨基末端激酶（phosphorylate c-Jun N-terminal kinase,p-JNK）、微管相關(guān)蛋白1輕鏈3II（microtubule associated protein1 light chain3 II,LC3II）及Sequestosome1（p62/SQSTMl）蛋白表達(dá)水平;自噬雙標(biāo)腺病毒（mRFP-GFP-LC3）熒光顯微鏡觀察自噬流變化;透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬小體及自噬溶酶體變化。結(jié)果（1）激動CD137-CD137L信號,小鼠VSMCs中p-JNK表達(dá)上升（P<0.05 vs對照組）,同時自噬起始相關(guān)蛋... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1.顯微鏡觀察小鼠原代VSMCs及α-SMA熒光染色Figure2.3.1.MicroscopyobservationofmouseprimaryVSMCsandα-SMAfluorescencestaining

圖 2.3.2. 不同濃度 SP600125 對 JNK 通路的抑制效果Figure 2.3.2. The effects of different concentrations of SP600125 on JNK Pathway.3 激動 CD137-CD137L 信號上調(diào)小鼠 VSMCs 中 p-JNK 表達(dá)在混合炎癥因子刺激 24 小時后，小鼠 VSMCs 細(xì)胞分為四組：對照組；CD137 激組（終濃度 10μg/ml 的 CD137L 重組蛋白）；JNK 抑制組（10μM 的 SP600125 預(yù)處理min 后加入終濃度 10μg/ml 的 CD137L 重組蛋白）；DMSO 組（與 JNK 抑制組等量二基亞砜預(yù)處理 30min 后加入終濃度 10μg/ml 的 CD137L 重組蛋白）。Western blot 顯示137 激動組 p-JNK 蛋白表達(dá)水平較對照組增高（1.15±0.19 比 0.72±0.21，P＜0.05），作用在加入 SP600125 后被抑制（0.61±0.21 比 1.15±0.19，P＜0.05）。而 DMSO 組 p-JNK白表達(dá)水平與 CD137 激動組相比無明顯差異（P＞0.05）（圖 2.3.3）

圖 2.3.2. 不同濃度 SP600125 對 JNK 通路的抑制效果Figure 2.3.2. The effects of different concentrations of SP600125 on JNK Pathway2.3.3 激動 CD137-CD137L 信號上調(diào)小鼠 VSMCs 中 p-JNK 表達(dá)在混合炎癥因子刺激 24 小時后，小鼠 VSMCs 細(xì)胞分為四組：對照組；CD137 激動組（終濃度 10μg/ml 的 CD137L 重組蛋白）；JNK 抑制組（10μM 的 SP600125 預(yù)處理30min 后加入終濃度 10μg/ml 的 CD137L 重組蛋白）；DMSO 組（與 JNK 抑制組等量二甲基亞砜預(yù)處理 30min 后加入終濃度 10μg/ml 的 CD137L 重組蛋白）。Western blot 顯示CD137 激動組 p-JNK 蛋白表達(dá)水平較對照組增高（1.15±0.19 比 0.72±0.21，P＜0.05），該作用在加入 SP600125 后被抑制（0.61±0.21 比 1.15±0.19，P＜0.05）。而 DMSO 組 p-JNK蛋白表達(dá)水平與 CD137 激動組相比無明顯差異（P＞0.05）（圖 2.3.3）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血管鈣化的骨調(diào)控機(jī)制新進(jìn)展[J]. 王中群,戴俏武,邵晨,嚴(yán)金川.  中華心血管病雜志. 2017 (01)
[2]CD137-CD137L信號通路通過調(diào)控小鼠血管平滑肌細(xì)胞自噬小體出胞影響動脈粥樣硬化鈣化形成[J]. 李波,李曉陽,仲威,邵晨,王中群,袁偉,嚴(yán)金川.  中華心血管病雜志. 2017 (01)
[3]CD137-CD137L信號通過TRAF6/JNK/AP-1通路調(diào)控小鼠血管平滑肌細(xì)胞活化T細(xì)胞核因子c1表達(dá)[J]. 徐源,王中群,仲威,邵晨,李波,劉俊,李曉陽,嚴(yán)金川.  中國動脈硬化雜志. 2017(01)
[4]CD137-CD137L信號通路對小鼠動脈粥樣斑塊及血管平滑肌細(xì)胞鈣化的影響[J]. 陳瑤,嚴(yán)金川,翁嘉懿,王中群,王翠平,邵晨.  中華心血管病雜志. 2016 (10)



本文編號：3509241