目的:研究缺氧復(fù)氧（HR）條件下H9C2細(xì)胞中FOXO4與Chop依賴的凋亡通路的關(guān)系方法:首先建立H9C2細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型。在缺氧復(fù)氧的情況下分步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。第一部分:FOXO4 siRNA干擾,分組為a.正常組（control）b.缺氧復(fù)氧組（HR）c.HR+陰性病毒d.HR+FOXO4-siRNA;第二部分:Chop siRNA干擾,分組為:a.HR+陰性干擾片段b.HR+Chop-siRNA;第三部分:FOXO4-siRNA+Chop-過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,分組為a.正常組（control）b.缺氧復(fù)氧組（HR）c.HR+陰性d.HR+FOXO4-siRNA+Chop-過(guò)表達(dá)質(zhì)粒。采用TUNEL檢測(cè)凋亡情況;Western Blot檢測(cè)各組FOXO4、Chop、Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)情況;CHIP檢測(cè)FOXO4與Chop的結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)果:（1）在缺氧復(fù)氧條件下,H9C2細(xì)胞中FOXO4、Chop、Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)較正常組明顯升高（p<0.05）,TUNEL檢測(cè)凋亡水平也明顯升高（p<0.05）。（2）沉默F(xiàn)OXO4后進(jìn)行缺氧復(fù)氧處理,F... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

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慢病毒沉默F(xiàn)OXO4對(duì)缺氧復(fù)氧條件下Chop、Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)的影響

第 3 章 結(jié)果升高，F(xiàn)OXO4-siRNA 組與 FOXO4-Negative 組相比 FOXO4、Chop、Cleaved-caspase 3 表達(dá)量明顯降低。C-D：顯示 A 的 WB 結(jié)果相對(duì)應(yīng)的柱狀圖。E：顯示 B 的 WB 結(jié)果相對(duì)應(yīng)的柱狀圖。*表示 HR 組與正常組相比，p＜0.05；** 表示 HR 組與正常組相比，p＜0.01；# 表示慢病毒沉默 FOXO4 缺氧復(fù)氧組與陰性病毒缺氧復(fù)氧組相比，p＜0.05；##表示表示慢病毒沉默 FOXO4 缺氧復(fù)氧組與陰性病毒缺氧復(fù)氧組相比，p＜0.01。

圖 3：轉(zhuǎn)染不同 Chop-siRNA 干擾片段對(duì) Chop 蛋白表達(dá)的影響A：WB 結(jié)果顯示 Chop-siRNA 246 干擾使 Chop 蛋白表達(dá)最低。B：顯示 A 圖相對(duì)應(yīng)的柱狀圖。**表示 Chop-siRNA 246 與正常組相比，p＜0.01;##表示 Chop-siRNA 463 與正常組相比，p＜0.01;$$ 表示 Chop-siRNA583 與正常組相比，p＜0.01。3.3 轉(zhuǎn)染 Chop-siRNA 246 干擾片段對(duì)缺氧復(fù)氧條件下 Chop 蛋白表達(dá)的影響分別轉(zhuǎn)染 Chop 陰性干擾片段、Chop-siRNA 至 H9C2 細(xì)胞內(nèi)，48 小時(shí)后進(jìn)行缺氧復(fù)氧處理。圖四結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染 siRNA 后，Chop、Cleaved-caspase3 蛋白表達(dá)量在缺氧復(fù)氧條件下較轉(zhuǎn)染 Chop 陰性干擾片段組相比明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）。


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