目的觀察腺病毒介導(dǎo)的人凝血因子Ⅸ（hFⅨ）基因在小鼠脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）中的表達(dá)情況。方法1細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定準(zhǔn)備4只3⁴周齡雄性SPF級C57BL/6J小鼠,采用頸椎脫臼法將小鼠處死,在超凈臺中操作,提取位于兩側(cè)腹股溝處的脂肪組織,用1%膠原酶充分消化,獲得單細(xì)胞懸液,接種在培養(yǎng)瓶,進(jìn)行原代小鼠脂肪干細(xì)胞及傳代培養(yǎng)。對細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察,用CCK-8試劑法測定細(xì)胞生長曲線,采用流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞表型進(jìn)行鑒定,成脂成骨誘導(dǎo)對細(xì)胞分化潛能進(jìn)行鑒定。2細(xì)胞分組及轉(zhuǎn)染選取生長旺盛的第3代ADSCs,隨機(jī)分成3組:空白組:將DMEM作為對照加入ADSCs培養(yǎng)瓶,空載組:以空病毒Ad-GFP轉(zhuǎn)染ADSCs,實(shí)驗(yàn)組:以重組腺病毒Ad-hFⅨ轉(zhuǎn)染ADSCs。將攜帶hⅨ基因的腺病毒轉(zhuǎn)染小鼠脂肪干細(xì)胞,將轉(zhuǎn)染后的ADSCs與未轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞形態(tài)及生長曲線進(jìn)行對比,觀察兩組之間有無變化。3轉(zhuǎn)染后細(xì)胞檢測采用RT-PCR檢測細(xì)胞中hFⅨ基因的表達(dá)情況,應(yīng)用Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)以及培養(yǎng)細(xì)胞上清液中hFⅨ蛋白的表達(dá)。采用ELI... 

【文章來源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ADSCs生長曲線

Fig.2 Growth curve of ADSCs表 3 第 3 代 ADSCs 不同培養(yǎng)時(shí)間吸光度(x ±s)Table 3 Absorbance value of P3 of ADSCs at different time組別培養(yǎng)時(shí)間（d）1 2 3 4 5 6 7轉(zhuǎn)染組 0.41 0.01 0.47 0.03 0.64 0.04 1.79 0.032.69±0.07 3.15 0.04 3.19 0.13未轉(zhuǎn)染組 0.46 0.01 0.51 0.03 0.64 0.06 1.63 0.04 2.52 0.06 2.83 0.01 3.04 0.06注：每組各時(shí)點(diǎn)樣本量 n=33) 成脂誘導(dǎo)結(jié)果ADSCs 貼壁融合約 50%加入成脂誘導(dǎo)液誘導(dǎo)，細(xì)胞增殖分裂受到抑制，胞體逐漸增大，呈不規(guī)則形，誘導(dǎo) 14d 后，油紅 O 染色，倒置顯微鏡下觀察有紅色脂滴形成（圖 3）。證明成脂誘導(dǎo)成功。

第 1 章 實(shí)驗(yàn)研究4) 成骨誘導(dǎo)結(jié)果ADSCs 貼壁融合約 50%加入成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)，誘導(dǎo) 3d 后，細(xì)胞由長梭圓形或多角形，可見細(xì)小黑色顆粒沉積，繼續(xù)誘導(dǎo)至第 9d，茜素紅染相差顯微鏡下觀察到橙紅色鈣化骨節(jié)（圖 4）。證明成骨誘導(dǎo)成功。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]按需治療血友病患者關(guān)節(jié)健康狀況臨床分析[J]. 馬樂,范猛,薛峰,姜文學(xué).  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2019(01)
[2]浙江省血友病診療專家指導(dǎo)意見[J].   浙江醫(yī)學(xué). 2017(09)
[3]血友病B替代治療藥物研究現(xiàn)狀及進(jìn)展[J]. 嚴(yán)紅,曾凡一.  生物工程學(xué)報(bào). 2016(02)



本文編號：3476009