本文關(guān)鍵詞：髓系腫瘤患者中TET2基因突變分析及DNA雙加氧酶研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:髓系腫瘤(Myeloid tumor)是一類造血干細(xì)胞起源的骨髓克隆性疾病,是一類惡性血液系統(tǒng)疾病的總稱。其包括有急性髓細(xì)胞白血病(acute myelocytic leukemia,AML),骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes,MDS),慢性骨髓增殖性腫瘤(chronic myeloproliferative neoplasms,cMPN)等,cMPN又包括原發(fā)性血小板增多癥(essential thrombocythemia,ET)、真性紅細(xì)胞增多癥(polycythemiavera,PV)和原發(fā)性骨髓纖維化(primary myelofibrosis,PMF)等。近年來研究發(fā)現(xiàn),Ten-eleven translocation-2(TET2)基因,在AML、MDS和cMPN等多種血液系統(tǒng)腫瘤中存在頻繁突變。這些腫瘤患者基因啟動子區(qū)的高甲基化狀態(tài)進(jìn)一步導(dǎo)致抑癌基因轉(zhuǎn)錄沉默,可能是惡性腫瘤患者中抑癌基因失活最常見的原因。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase,DNMT)催化的啟動子區(qū)域甲基化與TET蛋白催化的主動去甲基化過程存在一種動態(tài)平衡。大量數(shù)據(jù)表明,血液系統(tǒng)惡性腫瘤中存在DNA甲基化紊亂,除DNMT相關(guān)基因的作用外,TET2基因的突變、功能缺失可能亦與造血系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本實驗通過檢測初治髓系腫瘤患者TET2基因突變情況,了解髓系腫瘤患者中TET2基因的突變率及突變類型,同時對髓系腫瘤患者的TET2mRNA水平、TET2蛋白水平以及患者5羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5-hm C)水平進(jìn)行測定,并分析其與TET2基因突變的相關(guān)性,從而了解髓系腫瘤患者TET2基因突變與TET2基因表達(dá)及蛋白活性之間的關(guān)系,并探討其突變與造血功能調(diào)控異常及髓系腫瘤發(fā)生、發(fā)展之間的內(nèi)在聯(lián)系。方法:選取2015年2月至2016年1月于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液內(nèi)科門診及住院部就診的初治和緩解后的AML(非APL)、MDS及cMPN患者。其中初治AML患者40例,男性患者23例,女性患者17例,年齡16-70歲,中位年齡40歲;緩解后AML患者16例,年齡18-67歲,中位年齡39歲;MDS患者15例,其中男性患者8例,女性患者7例,年齡20-64歲,中位年齡56歲;MPN患者15例,其中男性患者9例,女性患者6例,年齡35-69歲,中位年齡48歲。同時篩選17例血液系統(tǒng)非惡性疾病患者作為對照,男9例,女8例,年齡16-59歲,中位年齡為37歲。應(yīng)用基因測序及RQ-PCR方法分別檢測患者骨髓液單個核細(xì)胞中TET2突變狀態(tài)和mRNA表達(dá)水平,同時采用Western Blot方法檢測TET2蛋白表達(dá)水平以及樣本基因組內(nèi)5-hm C含量的高低。結(jié)果:1 TET2基因突變檢測結(jié)果40例初治AML患者中有7例存在TET2基因突變,突變率為17.5%(7/40)。依據(jù)患者年齡、性別以及WHO分型進(jìn)行分組。突變組患者中位年齡為34歲(20-69),非突變組患者中位年齡為44歲(16-70),二者無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.807)。突變組男、女比例為1.33(4/3),非突變組男、女比例為1.35(19/14),二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.983)。依據(jù)WHO分型,40例AML患者中M2、M4及M5亞型人數(shù)分別為15例、13例和12例;上述三種AML亞型中TET2突變陽性人數(shù)分別為3例、2例和2例,突變陰性患者人數(shù)分別為12例、11例和10例,突變患者在WHO分型中的分布無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.879)。依據(jù)NCCN2014指南,可將40例初治AML患者分為預(yù)后良好組、中等組和預(yù)后不良組,人數(shù)分別為10例、24例和6例,其中TET2突變陽性人數(shù)分別為2例、5例和0例,突變陰性患者為8例、19例和6例,比較AML患者中TET2突變與未突變患者的預(yù)后分級,兩者無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.485)。對于初治AML患者予以蒽環(huán)類為主的聯(lián)合化療進(jìn)行誘導(dǎo)緩解治療,TET2基因突變組和非突變組完全緩解(CR)率分別為57.14%和84.85%,二組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.261)。15例MDS患者,發(fā)現(xiàn)有2例存在TET2基因突變,突變率為13.33%。其中1例患者為MDS-RCMD亞型,另1例患者為MDS-RAEB2型。15例cMPN患者中包括3例MF患者、7例ET患者和5例PV患者。對上述cMPN患者進(jìn)行TET2基因突變檢測,僅在1例PV患者樣本中發(fā)現(xiàn)TET2突變。受檢cMPN患者的TET2基因突變率為6.67%。綜上,在本研究受檢的髓系腫瘤患者中,AML、MDS和cMPN的TET2基因突變率分別為17.5%、13.33%和6.67%。2 髓系腫瘤患者中TET2 mRNA表達(dá)情況與正常對照組相比,40例初治AML病例(0.817±0.09vs.0.414±0.069;P0.01)、MPN病例(0.817±0.09 vs.0.469±0.073;P0.01)和MDS病例(0.817±0.09 vs.0.320±0.028;P0.01)mRNA表達(dá)量均明顯降低,有統(tǒng)計學(xué)差異。16例取得完全緩解的AML患者TET2 mRNA水平與40例初治AML患者相比有所升高(0.769±0.082 vs.0.414±0.069;P0.01),與對照組無明顯差別(0.769±0.082 vs.0.817±0.09;P0.05)。40例初治AML中7例TET突變陽性患者TET2 mRNA相對表達(dá)量與突變陰性患者對比無統(tǒng)計學(xué)意義(0.461±0.035 vs.0.405±0.071;P0.05)。3 TET2蛋白表達(dá)情況與對照組相比,初治AML患者TET2蛋白表達(dá)水平(0.837±0.078 vs.0.329±0.034;P0.01)、MPN患者TET2蛋白表達(dá)水平(0.837±0.078 vs.0.517±0.071;P0.01)和MDS患者TET2蛋白表達(dá)水平(0.837±0.078 vs.0.269±0.018;P0.01)均明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。16例CR AML患者的TET2蛋白水平與對照組相比,無明顯差別(0.788±0.079 vs.0.837±0.078;P0.05)。7例TET2基因突變陽性初治AML患者TET2蛋白相對表達(dá)水平(0.310±0.030)與33例突變陰性患者表達(dá)水平(0.334±0.034)對比,二者之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)4 5-hm C含量檢測40例初治AML患者基因組5-hm C含量為(0.063±0.011)%,15例cMPN患者5-hm C含量為(0.081±0.021)%,15例MDS患者5-hm C含量為(0.013±0.003)%,對照組5-hm C含量(0.128±0.026)為%。各實驗組5-hm C含量表達(dá)均低于對照組(P0.01,P0.01,P0.01)。16例CR患者5-hm C濃度水平為(0.094±0.04)%,誘導(dǎo)化療后取得CR的AML患者5-hm C含量高于初治患者(P0.01)。7例TET2基因突變陽性初治AML患者5-hm C含量(0.054±0.013)%與突變陰性患者含量(0.065±0.025)%對比,二者之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1 TET2基因在AML(非APL)患者、MDS患者和cMPN患者中均檢測到突變發(fā)生,以AML的突變發(fā)生率最高。但MDS患者突變種類最多。2 在受檢的髓系腫瘤患者中,TET2 mRNA表達(dá)水平和TET2蛋白含量以及5-hm C濃度均較正常對照組有所降低。推測TET2基因表達(dá)的缺失與髓系腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有相關(guān)性。3 存在TET2基因突變的AML(非APL)患者,誘導(dǎo)化療后,完全緩解率較非突變患者無明顯差異。4 治療后達(dá)完全緩解的AML患者與初治AML患者相比,TET2 mRNA水平和5-hm C水平均有升高,可能與患者體內(nèi)腫瘤負(fù)荷減少相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：髓系腫瘤 去甲基化 TET2突變 DNA雙加氧酶 5-hmC
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-23
• 結(jié)果23-27
• 附圖27-35
• 附表35-42
• 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 綜述 髓系腫瘤細(xì)胞中TET2基因突變分析及DNA加氧酶功能研究47-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 致謝58-59
• 個人簡歷59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Wei Zhang;Zong-hong Shao;Rong Fu;Hua-quan Wang;Li-juan Li;Jun Wang;Wen Qu;Yong Liang;Guo-jin Wang;Xiao-ming Wang;Yuhong Wu;Hong Liu;Jia Song;Jing Guan;Li-min Xing;;TET2 Expression in Bone Marrow Mononuclear Cells of Patients with Myelodysplastic Syndromes and Its Clinical Significances[J];Cancer Biology & Medicine;2012年01期

  本文關(guān)鍵詞：髓系腫瘤患者中TET2基因突變分析及DNA雙加氧酶研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：345992