硝苯地平對ApoE -/- 小鼠RAW 264.7巨噬細胞源性膽固醇逆向轉(zhuǎn)運的影響
發(fā)布時間:2021-10-22 07:52
背景與目的動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)已成為引發(fā)心腦血管疾病的頭號殺手,現(xiàn)已證明其為一種慢性炎癥性疾病。當今,公認的抗動脈粥樣硬化的機制主要包括三個方面,即內(nèi)皮祖細胞的再生、血管壁的再生以及巨噬細胞調(diào)節(jié)的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(reversecholesterol transport,RCT)。其中,RCT是目前最受關(guān)注的防御機制。膽固醇逆向轉(zhuǎn)運是指機體將過多的膽固醇從外周細胞轉(zhuǎn)運至肝臟,繼而分泌至膽汁,最后經(jīng)糞便排出體外的過程。近年研究顯示,作為降壓藥物使用的長效L-型鈣通道阻滯劑(Ca2+channel blocker,CCB)具有抗動脈粥樣硬化作用,而硝苯地平作為傳統(tǒng)的鈣通道阻滯劑,已被證實其能改善冠脈循環(huán)及血管內(nèi)皮功能,并具有抗動脈粥樣硬化作用。然而CCB抗動脈粥樣硬化作用是否與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運有關(guān)尚不十分清楚。據(jù)有關(guān)體外研究顯示:硝苯地平通過刺激LXRα表達,增加LXRα下游基因ABCA1,ABCG1,SR-BI的表達,增強巨噬細胞膽固醇外流率,從而發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用。本研究擬在前期研究基礎(chǔ)上,以載脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠為模型,深入探討硝...
【文章來源】:中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】:80 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
膽固醇逆向轉(zhuǎn)運過程:肝臟分泌貧脂的apoA-I在ABCA1的作用下可以迅速吸收膽固醇,貧脂的apoA-1同時也可以在ABCA1的作用下增強膽固醇從巨噬細胞的流出
驗小鼠 北京大學(xué)動物中心方法及實驗內(nèi)容W 264.7 巨噬細胞的培養(yǎng)燈、酒精棉球、鹽水瓶、試管架、細胞培養(yǎng)瓶、膠頭滴物品放于超凈工作臺上,用紫外燈照射消毒 30min。的 RAW 264.7 巨噬細胞從-80℃冰箱中拿出來,放于 37℃細胞吸入離心管中,與低溫離心機上以 1200rpm 離心 5m血清的 DMEM 高糖細胞培養(yǎng)液培養(yǎng),于倒置顯微鏡下仔放于 37℃,5% CO2條件的孵箱中培養(yǎng)。 2~3 天用 PBS 漂洗細胞,更換新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),當用 0.25%胰蛋白酶消化,1200rmp 離心 5min,棄去培養(yǎng)液照 1:3 比例傳代(見圖 2-1)。
圖 2-2 標記[H3]-膽固醇的荷脂 RAW 264.7 巨噬細胞 ApoE-/-小鼠血脂蛋白濃度-小鼠腹腔注射標記有[H3]膽固醇的荷脂 RAW 264.7 巨噬細。用 0.9%氯化鈉溶液配制的肝素鈉溶液涂抹小鼠下頜下部入用涂有肝素溶液的抗凝管中,滴出 3~4 滴后用棉簽給小止 2h 后 4000r/min 離心 5min,分離上層血漿,于全自動固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C-C)濃度。計學(xué)方法S 18.0 軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析,數(shù)據(jù)資料以 ±s 表示。
本文編號:3450680
【文章來源】:中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】:80 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
膽固醇逆向轉(zhuǎn)運過程:肝臟分泌貧脂的apoA-I在ABCA1的作用下可以迅速吸收膽固醇,貧脂的apoA-1同時也可以在ABCA1的作用下增強膽固醇從巨噬細胞的流出
驗小鼠 北京大學(xué)動物中心方法及實驗內(nèi)容W 264.7 巨噬細胞的培養(yǎng)燈、酒精棉球、鹽水瓶、試管架、細胞培養(yǎng)瓶、膠頭滴物品放于超凈工作臺上,用紫外燈照射消毒 30min。的 RAW 264.7 巨噬細胞從-80℃冰箱中拿出來,放于 37℃細胞吸入離心管中,與低溫離心機上以 1200rpm 離心 5m血清的 DMEM 高糖細胞培養(yǎng)液培養(yǎng),于倒置顯微鏡下仔放于 37℃,5% CO2條件的孵箱中培養(yǎng)。 2~3 天用 PBS 漂洗細胞,更換新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),當用 0.25%胰蛋白酶消化,1200rmp 離心 5min,棄去培養(yǎng)液照 1:3 比例傳代(見圖 2-1)。
圖 2-2 標記[H3]-膽固醇的荷脂 RAW 264.7 巨噬細胞 ApoE-/-小鼠血脂蛋白濃度-小鼠腹腔注射標記有[H3]膽固醇的荷脂 RAW 264.7 巨噬細。用 0.9%氯化鈉溶液配制的肝素鈉溶液涂抹小鼠下頜下部入用涂有肝素溶液的抗凝管中,滴出 3~4 滴后用棉簽給小止 2h 后 4000r/min 離心 5min,分離上層血漿,于全自動固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C-C)濃度。計學(xué)方法S 18.0 軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析,數(shù)據(jù)資料以 ±s 表示。
本文編號:3450680
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