本文關(guān)鍵詞：鐵超載誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激水平的表達改變，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:20世紀(jì)80年代Sullivan首次提出鐵與心血管疾病的關(guān)系,目前鐵超載與心血管疾病的關(guān)系成為研究熱點,鐵負(fù)荷過載常常導(dǎo)致心血管損傷疾病的產(chǎn)生,并且密切關(guān)聯(lián)于心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程。研究顯示鐵超載時活性氧(ROS)含量顯著增多,能夠激發(fā)心肌細(xì)胞凋亡進程,應(yīng)用鐵螯合劑是否能夠有效減緩以上變化。目的及意義:實驗中通過測定鐵超載模型下及鐵螯合劑治療組沙鼠ROS表達,評估氧化-抗氧化系統(tǒng)狀態(tài),并通過Western blot檢測心肌組織凋亡蛋白Bax、Bcl-2含量,據(jù)此計算Bax/Bcl-2比率評估鐵超載與心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)系及鐵螯合劑治療作用。探索鐵超載與心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)系以及鐵鏊合劑的保護作用,為臨床上鐵超載相關(guān)的心血管疾病的預(yù)防及治療提供進一步的指導(dǎo)。方法:選取12月齡健康雌雄性長爪沙鼠共30只,體重在200-500g之間,將其放置于22±2℃的環(huán)境中飼養(yǎng),維持12H:12H晝夜循環(huán),自由采食及采水模式,在進行試驗前使沙鼠在新環(huán)境中適應(yīng)至少2周。在實驗期間保證每周詳細(xì)觀察并精確測量動物的體重。入組動物按照隨機分組方法分為3組:3個月對照組(C-3m):未給予鐵劑,其與鐵負(fù)荷后給予藥物治療3個月組年齡等同;10周鐵負(fù)荷組(IO):入組的動物以每5天為一階段進行右旋糖酐鐵(iron dextran)100mg/kg皮下注射,共計3個月;鐵負(fù)荷后給藥3個月組(IO-DFR):將鐵鏊和劑(deferasirox)100mg/kg/d置于1-m L注射器中經(jīng)口給藥于10周鐵劑負(fù)荷后動物,共計3個月。前期實驗已證實鐵超載模型建立成功[1];本實驗通過測定不同組沙鼠MDA含量及SOD活性,評估鐵超載時氧化-抗氧化系統(tǒng)狀態(tài);利用對各組沙鼠進行特殊組織化學(xué)染色、免疫組化、熒光染色等評估鐵超載時心肌組織中ROS的表達;通過應(yīng)用Western blot對各組沙鼠心肌細(xì)胞中的凋亡相關(guān)蛋白表達水平進行檢測及分析;旨在研究鐵超載導(dǎo)致心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激增加與心肌細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系,及鐵鏊合劑的治療作用。結(jié)果:(1)三組小鼠心肌組織中MDA及SOD測定結(jié)果顯示:鐵負(fù)荷后未給藥3個月組(IO-3m)與3個月對照組(C-3m)比較MDA含量升高了83.71%,SOD活性下降了49.41%;而鐵負(fù)荷后鐵螯合劑治療3個月組(IO-DFR)與鐵負(fù)荷后未給藥3個月組(IO-3m)比較,MDA含量降低了28.14%,SOD活性顯著升高65.12%(P0.05差異均有統(tǒng)計學(xué)意義)。(2)試驗中三組小鼠測定結(jié)果如附圖2所示:HE熒光染色結(jié)果顯示IO-3m組較C-3m紅色熒光強度增加,ROS表達增加,而鐵螯合劑治療組(IO-DFR)紅色熒光強度較IO-3m組減弱,ROS表達減少;Nitrotyrosine與4-HNE免疫組化染色中結(jié)果呈現(xiàn)綠色熒光,IO-3m組較C-3m綠色熒光強度增加,說明ROS表達增加,而鐵螯合劑治療組(IO-DFR)綠色熒光強度較IO-3m組減弱,說明ROS表達減少。以上數(shù)據(jù)差異顯著(P0.05有統(tǒng)計學(xué)意義)。(3)Western blot檢測Bcl-2、Bax的表達結(jié)果如下:分析數(shù)據(jù)顯示,凋亡蛋白Bcl-2三組間無明顯差距(P0.05,無統(tǒng)計學(xué)意義);IO-3m組較C-3m Bax表達增加了31.28%,IO-DFR組較IO-3m組Bax表達降低了18.76(P0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義)。Bax/Bcl-2比值結(jié)果顯示,IO-3m組Bax/Bcl-2比值較C-3m明顯升高,而IO-DFR比值較IO-3m組明顯降低(P0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義)。結(jié)果提示鐵超載時沙鼠心肌組織中凋亡相關(guān)蛋白含量明顯增加,鐵鏊合劑干預(yù)可降低心肌細(xì)胞凋亡蛋白含量。結(jié)論:(1)鐵超載時,過量的鐵使沙鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激表達增加,鐵螯合劑可以有效地緩解這些改變。(2)鐵超載時,心肌組織中凋亡相關(guān)蛋白片段含量明顯改變,鐵超載可能使心肌細(xì)胞凋亡加重。(3)鐵螯合劑干預(yù)后心肌組織中凋亡蛋白量明顯降低,Bax/Bcl-2比值下降。
【關(guān)鍵詞】：鐵超載 細(xì)胞凋亡 活性氧 鐵螯合劑
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54
【目錄】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-16
• 第1章 緒論16-25
• 1.1 引言16-19
• 1.2 綜述鐵超載致氧化應(yīng)激誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的分子機制19-25
• 1.2.1 鐵在人體的儲存形式及生理功能19
• 1.2.2 鐵超載的毒性作用19-20
• 1.2.3 鐵超載導(dǎo)致心臟疾病及治療20-21
• 1.2.4 鐵超載引起氧化應(yīng)激導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡的分子機制21-22
• 1.2.5 Akt介導(dǎo)的信號通路在鐵超載導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡重要作用22-24
• 1.2.6 總結(jié)與展望24-25
• 第2章 實驗材料25-28
• 2.1 實驗動物選擇25
• 2.2 主要試劑25-26
• 2.3 主要儀器26-27
• 2.4 統(tǒng)計方法27-28
• 第3章 實驗方法28-33
• 3.1 實驗動物的準(zhǔn)備28
• 3.2 組織采集28-29
• 3.3 冰凍組織切片的制備29
• 3.4 組織中MDA含量與SOD活性測定29-30
• 3.5 氧化應(yīng)激(ROS)表達相關(guān)的生物標(biāo)志物30-31
• 3.6 Western blot檢測Bax、Bcl-2 及Bax/Bcl-2 的比值31-33
• 3.6.1 總蛋白的提取31
• 3.6.2 檢測蛋白濃度31-32
• 3.6.3 SDS-PAGE電泳32
• 3.6.4 免疫反應(yīng)32
• 3.6.5 蛋白檢測32-33
• 第4章 結(jié)果33-39
• 4.1 組織中MDA含量與SOD活性測定結(jié)果33-34
• 4.2 鐵鏊合劑治療能降低鐵超載誘導(dǎo)的ROS表達增加34-36
• 4.3 蛋白 Bcl-2 、Bax 及 Bax/Bcl-2 的比值測定結(jié)果36-39
• 第5章 討論39-43
• 第6章 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-50
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果50-51
• 致謝51

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