背景和目的:阻塞性呼吸睡眠暫停低通氣綜合征（OSAHS）的主要臨床特征是睡眠狀態(tài)下的間歇缺氧（IH）,也是導(dǎo)致包括動脈粥樣硬化在內(nèi)的很多心血管疾病的獨立危險因素。在臨床觀察中發(fā)現(xiàn)OSAHS病人外周血單核細(xì)胞RAGE含量明顯高于正常人,持續(xù)正壓通氣治療能減少病人外周血單核細(xì)胞RAGE表達(dá)。OSAHS致動脈粥樣硬化的具體發(fā)病機制尚不明確。目前研究表明RAGE/AGEs配體系統(tǒng)在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。為了探討RAGE/AGEs在OSAHS致動脈粥樣硬化中的作用,本實驗擬使用THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）模擬IH導(dǎo)致動脈粥樣硬化的體外細(xì)胞模型,使用RNA干擾法沉默THP-1細(xì)胞的RAGE基因表達(dá),檢測其對IH條件下的THP-1細(xì)胞單核細(xì)胞趨化、巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化、泡沫細(xì)胞細(xì)胞形成等的影響。方法:1.首先檢測THP-1細(xì)胞在IH 0h、12h、24h、48h后RAGE、NF-kB p65、AGEs表達(dá)量。2.然后使用靶向RAGE的shRNA構(gòu)建的慢病毒轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞,并篩選出沉默RAGE效率最高的穩(wěn)定細(xì)胞株用于后續(xù)實驗。實驗分為四組:空白對照組:正常培養(yǎng);實驗對照組A:RA... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

間歇缺氧0h、12h、24h、48h后THP-1細(xì)胞RAGE、NF-kBp65的表達(dá)

00）THP-1 細(xì)胞經(jīng) PMA（100ng/ml）誘導(dǎo)分化 24 小時后成RAGE 慢病毒轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定細(xì)胞株篩選胞經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染及嘌呤霉素篩選后獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)挑選出最優(yōu)干擾效率慢病毒（shRAN/RAGE1255）光圖片如下：

圖 4-3（×100）THP-1 細(xì)胞經(jīng) PMA（100ng/ml）誘導(dǎo)分化 24 小時后成為巨噬細(xì)胞4.4 shRNA/RAGE 慢病毒轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定細(xì)胞株篩選THP-1 細(xì)胞經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染及嘌呤霉素篩選后獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株并經(jīng) WB及 mRNA 驗證挑選出最優(yōu)干擾效率慢病毒（shRAN/RAGE1255）細(xì)胞株，最優(yōu)穩(wěn)定細(xì)胞株熒光圖片如下：


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