目的研究二氧化鈦納米顆粒（TiO2-NPs）和二氧化硅納米顆粒（SiO2-NPs）對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及其機制，為評價其對人體心血管系統(tǒng)的潛在影響提供實驗依據(jù)。方法以TiO2-NPs （10、30、50、100nm四個粒徑）和SiO2-NPs （10、25、50、100nm四個粒徑）為研究對象，濃度梯度為0.2、1、5、25μg/mL，不加納米顆粒為對照組，作用于人臍靜脈內(nèi)皮（HUVECs）細(xì)胞。采用CCK-8法檢測納米顆粒對HUVECs細(xì)胞增殖的影響；Hoechest33258染色觀察處理后的細(xì)胞核形態(tài)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率；Western Blot檢測凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)情況。結(jié)果1.不同粒徑不同濃度TiO2-NPs和SiO2-NPs作用HUVECs細(xì)胞后，對細(xì)胞增殖產(chǎn)生不同程度的抑制。同一粒徑下，隨顆粒濃度增加，細(xì)胞存活率明顯降低；相同濃度條件下，TiO2-NPs隨粒徑增加，細(xì)胞存活率顯著降低；SiO2-NPs隨粒徑減小，細(xì)胞存活率降低明顯。2.納米顆粒處理細(xì)胞后，再用Hoecst33258染色，可見細(xì)胞核著色加深，核碎裂，并出現(xiàn)典型的凋亡小體。3.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

正常HUVECs（倒置顯微鏡，×200）

1. 納米顆粒對 HUVECs 細(xì)胞增殖的影響用不同濃度（0.2、1、5、25 μg/mL）、不同粒徑的 TiO2-NPs 和 SiO2-NP理 HUVECs 細(xì)胞 24 h 后，CCK-8 法檢測各組細(xì)胞存活率。結(jié)果如圖 2 和圖 3 所示，同一粒徑的 TiO2-NPs 和 SiO2-NPs 染毒組細(xì)胞率隨濃度增加而降低，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，并具有的濃度-效應(yīng)關(guān)系；在同一濃度條件下（1、5、25 μg/mL），TiO2-NPs 組隨粒徑增加細(xì)胞存明顯下降（圖 2，P＜0.05）；SiO2-NPs 組在同一濃度條件下（0.2、1、5、25 μg/隨粒徑減小，存活率顯著降低（圖 3），且具有一定的粒徑-效應(yīng)關(guān)系。TiO2的粒徑為 100 nm，濃度為 25 μg/mL 時，細(xì)胞存活率為 40.7%±3.2；SiO2-NP粒徑為 10 nm，濃度為 25 μg/mL 時，細(xì)胞存活率為 28.6%±2.6，設(shè)定對照組率為 100%。

圖 3. 不同濃度、不同粒徑 SiO2-NPs 對 HUVECs 存活率影響。*濃度之間比較 P＜0.05 vs control，#粒徑之間比較 P＜0.05 vs control. 細(xì)胞核形態(tài)學(xué)觀察Hoechst 33258 是一種 DNA 染料，能穿過細(xì)胞膜，使得細(xì)胞核著色，在紫下呈現(xiàn)藍(lán)色熒光。正常細(xì)胞核著色后呈淡藍(lán)色，染色均勻，核膜完整，細(xì)胞狀規(guī)則呈圓形；發(fā)生凋亡的細(xì)胞核被著色成深藍(lán)色，致密濃染，或呈碎塊狀濃染，晚期有典型的凋亡小體出現(xiàn)。如圖 4、5 所示，Con 組細(xì)胞核呈規(guī)則的圓形，著淡藍(lán)色，其余各處理組細(xì)呈不均一濃染，并有核碎裂和凋亡小體出現(xiàn)，說明經(jīng)納米顆粒處理之后的細(xì)生凋亡。


本文編號：3412572