發(fā)布時(shí)間：2021-09-17 16:06

　　目的復(fù)制氧化性低密度脂蛋白（oxygenized low density lipoprotein,ox-LDL）誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）氧化損傷模型,從TBX20/PPARγ/PON2信號(hào)通路的角度探究齊墩果酸（oleanolic acid,OA）對(duì)該模型的保護(hù)作用。方法CCK-8篩選ox-LDL作用24h后損傷HUVECs的合適濃度、OA細(xì)胞毒性以及OA預(yù)保護(hù)時(shí)間和濃度。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組為:正常對(duì)照組、ox-LDL模型組、OA藥物組（10,20,40μmol/L）;酶化學(xué)方法檢測(cè)各分組細(xì)胞中過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、一氧化氮（NO）、總一氧化氮合酶（NOS）的活性或含量;電子自旋共振（ESR）技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）自由基和一氧化氮（NO）自由基的生成量;Real-time PCR和Western bolt技術(shù)檢測(cè)TBX20、PPARγ、PON2mRNA和蛋白的表達(dá);脂質(zhì)體瞬時(shí)siRNA轉(zhuǎn)染以及加入抑制劑使細(xì)胞中蛋白表達(dá)沉默,Western blot檢測(cè)TBX2... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 主要試劑與材料
    1.2 細(xì)胞株
    1.3 儀器設(shè)備
第二章 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的傳代培養(yǎng)
    2.2 預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選ox-LDL造模濃度以及OA保護(hù)作用濃度以及最佳預(yù)保護(hù)時(shí)間
        2.2.1 ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs氧化損傷模型的建立
        2.2.2 不同濃度OA對(duì)HUVECs的直接影響
        2.2.3 OA預(yù)保護(hù)時(shí)間的篩選
    2.3 實(shí)驗(yàn)分組及ox-LDL處理
    2.4 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目及檢測(cè)指標(biāo)
        2.4.1 OA對(duì)HUVECs氧化損傷的保護(hù)作用
        2.4.2 各組細(xì)胞中NO、NOS、CAT、GSH-PX活性或含量的測(cè)定
        2.4.3 電子自旋共振（ESR）同時(shí)檢測(cè)各組細(xì)胞中一氧化氮(NO)以及活性氧（ROS）含量
        2.4.4 免疫印跡Western blot
        2.4.5 熒光定量PCR(Real-time PCR)
        2.4.6 siRNA脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
    2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 CCK-8 法篩選ox-LDL造模濃度以及齊墩果酸細(xì)胞毒性
    3.2 不同濃度齊墩果酸預(yù)處理不同時(shí)間對(duì)HUVECs存活率的影響
    3.3 齊墩果酸對(duì)氧化損傷的HUVECs存活率的影響
    3.4 OA對(duì)細(xì)胞內(nèi)NO、NOS、CAT、GSH-PX活性或含量影響
    3.5 ESR同時(shí)捕捉檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ROS及NO含量
    3.6 OA對(duì)ox-LDL損傷的HUVECs內(nèi)TBX20、PPARγ、PON2蛋白以及mRNA表達(dá)的影響
    3.7 TBX20-siRNA轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
    3.8 TBX20 siRNA轉(zhuǎn)染后HUVECs內(nèi)TBX20、PPARγ蛋白含量檢測(cè)
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述的參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]齊墩果酸對(duì)oxLDL誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[J]. 王道艷,王志,張崢,趙慧慧,韓彥弢.  青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2014(06)
[2]炎癥與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 褚現(xiàn)明,李冰,安毅,董果雄.  中國分子心臟病學(xué)雜志. 2010(03)
[3]MTT法和CCK-8法檢測(cè)懸浮細(xì)胞增殖的比較[J]. 侯春梅,李新穎,葉偉亮,曹曦元,肖鶴,黎燕.  軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊. 2009(04)
[4]氧化應(yīng)激與高血壓血管內(nèi)皮損傷[J]. 趙凱,楊萬松.  天津醫(yī)藥. 2006(12)
[5]對(duì)氧磷酶基因多態(tài)性及血漿同型半胱氨酸硫內(nèi)酯復(fù)合物水平與冠心病的關(guān)系[J]. 秦勤,李穎莉,趙福梅,王紅,李楊,崔讓莊,趙炳讓.  中華心血管病雜志. 2006(09)
[6]過氧化物酶體增殖物激活受體γ與動(dòng)脈粥樣硬化[J]. 路一平,邱健.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2006(06)
[7]Effects of oxidized low density lipoprotein on the growth of human artery smooth muscle cells[J]. ZHAO Gao-feng, SENG Jing-jing, ZHANG Hua and SHE Ming-peng Department of Thoracic Surgery, First Teaching Hospital, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China Department of Pathology, Institute of Basic Medical Sciences, Peking Union Medical College, Beijing 100005, China.  Chinese Medical Journal. 2005(23)
[8]Paraoxonase gene cluster variations associated with coronary heart disease in Chinese Han women[J]. SU Shao-yong, CHEN Jian-hong, HUANG Jian-feng, WANG Xiao-ling, ZHAO Jian-gong, SHEN Yan, QIANG Bo-qin and GU Dong-fengDivision of Population Genetics, Cardiovascular Institute and Fu Wai Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100037, China National Human Genome Center, Beijing, 3-707 North Yongchang Rd., Beijing 100176, China.  Chinese Medical Journal. 2005(14)
[9]血管內(nèi)皮功能障礙與冠狀動(dòng)脈疾病[J]. 張鈞華.  中華老年心腦血管病雜志. 2002(01)



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